Ensayos de citotoxicidad in vitro : Comparación de MTT y cristal violeta en dos líneas celulares expuestas al extracto de Ipomoea carnea

• Autores: García, D. C.; Gómez, Tamara Yoana.; Morales, C.; Pistán, M. E.; Cholich, Luciana Andrea
• Año de publicación: 2023
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: documento de conferencia
• Materia: Células gliales; Células epiteliales; Toxicidad
• Institución: Universidad Nacional del Nordeste

Fil: García, D. C. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Fil: Gómez, Tamara Yoana. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Fil: Morales, C. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Fil: Pistán, M.E. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Fil: Cholich, Luciana Andrea. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Los ensayos de citotoxicidad se utilizan ampliamente en los estudios toxicológicos in vitro. Existen varios ensayos, los más comúnmente empleados para la detección de citotoxicidad o viabilidad celular tras la exposición a sustancias tóxicas son la liberación de LDH, el rojo neutro, el MTT y cristal violeta. La planta I. carnea contiene swainsonina y calisteginas, ambos son alcaloides y responsables de producir una enfermedad de almacenamiento lisosomal (EAL) de origen adquirido en rumiantes principalmente. El objetivo del estudio fue comparar dos ensayos de citotoxicidad y evaluar la sensibilidad de dos líneas celulares (glía y epitelial) expuestos al extracto alcaloidal de I. carnea. Para los ensayos de citotoxicidad se emplearon las líneas celulares derivadas de glioma C6 (ATCC:CCL-107 ™) y epitelial mamaria LM3 (RRID:CVCl-D269). Estas fueron sembradas en placas de 96 pocillos, a una concentración por well de 3.0 x 104 células en medio de crecimiento (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa una confluencia del 80%, se retiró el medio de cultivo y diferentes concentraciones (100-400 μM de SW presente en el extracto) fueron adicionadas a las células (200 μL/pocillo) para luego incubarse por 48h a 37°C y 5% de CO2. La viabilidad fue determinada mediante el ensayo del colorante cristal violeta (CV) y MTT. Luego de 48 h de exposición, las células de las líneas C6 y LM3 tratadas con diferentes concentraciones del extracto evidenciaron a partir de ambos ensayos un efecto citotóxico dosis dependiente, siendo estadísticamente significativo con respecto al control (p ≤ 0.05). La disminución de la viabilidad fue más evidente en las células de la línea LM3 con respecto a C6 a la concentración más alta ensayada (MTT: 12% vs 47% y CV: 21% vs 40% respectivamente). Ambos ensayos reflejaron similares resultados, no siendo estadísticamente significativos (p ≤ 0.05). A partir del análisis se sugiere que las células gliales podrían ser menos susceptibles que las células epiteliales a los efectos de los alcaloides presentes en I. carnea. A pesar de que ambas técnicas de citotoxicidad no arrojaron diferencias, es conveniente utilizarlas para aumentar la fiabilidad de los resultados obtenidos