Pectinasas fúngicas : estudios comparativos de producción por fermentación sumergida y en sustrato sólido y estabilidad en sistemas deshidratados

• Autores: Taragano, Viviana M.
• Año de publicación: 2000
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Pilosof, Ana María Renata
• Materia: PECTINASAS; FERMENTACION SUMERGIDA; FERMENTACION EN ESTADO SOLIDO; REPRESION CATABOLICA; CONIDIACION; DESNATURALIZACION; INACTIVACION; PECTINASES; SOLID STATE FERMENTATION; SUBMERGED FERMENTATION; CATABOLITE REPRESSION; CONIDIATION; DENATURATION; INACTIVATION
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Se optimizaron las condiciones de fermentación en medio líquido (FEL)y sólido (FES)para obtener extractos con alta actividad pectinliasa y poca pectinesterasa a partirdela cepa Aspergillus niger 148, seleccionada entre 165 cepas. Se caracterizaron cinéticamente las fermentaciones para: azúcares reductores yproteínas en el medio de fermentación; biomasa (ajustó al modelo logístico siendoinversa a la evolución del pH); producción de las tres enzimas del complejopectinolítico y conidiación (en FES) En FEL,se estudió el efecto combinado de la aw y la represión catabólica por glucosa,observándose efectos diferencialesen cada enzima. Los pesos moleculares de las pectinasas se determinaron por SDS-PAGE siendo:pectinliasa: 48,2 kDa; poligalacturonasa: 39,1 kDa; pectinesterasa: 26,9 kDa. Se utilizóun diseño experimental de red de Doehlert y una metodología de superficiesde respuesta, para comparar el efecto de pH, aw y tiempo en la producción depectinasas por FES y FEL. Una FES realizada a aw 0,981 y pH 7 por 3 días permitió obtenerun extracto rico en pectinliasa [65% de las proteínas totales). Se caracterizo la entalpía y temperatura de desnaturalización y la temperatura detransición vítrea de la pectinliasa deshidratado y parcialmente purificada en función dela humedad. Estudios cinéticos comparativos de la desnaturalización y pérdida de actividadpectinliasa del extracto deshidratado o en solución, indicaron que el principalmecanismo de pérdida de actividad enzimótica en solución sería la desnaturalización adiferencia del sistema deshidratado, donde la pérdida de actividad de la enzima no sevio asociada con la desnaturalización
Aspergillus niger 148 was selected between 165 strains and fermentations in solid [SSF]and submerged (SmF) state were carried out in order to optimize theproduction of pectinolytic extracts rich in pectinlyase and with low pectinesterase activity. Kinetics of: reducing sugars and proteins in fermentation medium; biomass (itfitted to the logistic model and was inverse to pH evolution]; production of thethree pectinolytic enzymes and conidiotion (inSSF)were determined. Combined effect of aw and catabolite repression by glucose in SmF was studied. Differential effects for each enzyme were observed. Molecular weights of pectinoses were determined by means of SDS-PAGE:pectinlyase: 48,2 KDa; polygalacturonase: 39,1 KDa;pectinesterose: 26,9 KDa. A Doehlert experimental design and a surface response methodology were usedin order to compare pH, aw and time effects in SSF and SmF. The followingconditions for SSF allowed the production of a rich pectinlyase extract (65% oftotal proteins): aw:0,981; pH: 7 and 3 days of fermentation. Entholpy and denaturation temperatures, as well as glass transition temperature,were determined in the dehydrated and partially purified rich pectinlyase extractas affected by moisture. Comparative kinetic studies of denaturation and pectinlyase activity loss indehydrated and solubilized pectinlyase extract indicated that denaturation mightbe the main mechanism of activity loss in solution. Contrarily, activity loss indehydrated extract was not associated with denaturation.
Fil: Taragano, Viviana M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.