Regulación de las proteínas 14-3-3 por acetilación. Estudio comparativo durante el ciclo celular y la diferenciación de células madre mesenquimales adultas

• Autores: Frontini López, Yesica Romina
• Año de publicación: 2020
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Uhart, Marina; Fernández Tome, María del Carmen; Bustos, Diego Martín; Adamo, Ana María; Varone, Cecilia; Raingo, Jesica
• Materia: Familia de proteínas 14-3-3; Células madre mesenquimales adultas; Diferenciación; Ciclo celular; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

The 14-3-3 protein family constitutes an essential component in the regulation of the signaling machinery by coupling phosphorylated proteins in Ser/Thr residues. Considered redundant, ubiquitous and with relatively low variable levels, they have been studied as an accessory in several signaling pathways. In this thesis, we evaluate the dynamics of inhibition by acetylation of its essential residue N-?-lysine 49/51 during the osteogenic differentiation process of hu-man mesenchymal stem cells derived from adipose tissue and the cell cycle. Firstly, we meas-ured the protein levels of the different family paralogs during osteogenesis and found an in-crease in the levels of the ? and ? paralogs, while ? was diminished. Likewise, we observed an increase in the absolute levels of 14-3-3AcK49/51 during the differentiation of the hASC and the S phase of the cell cycle. Among the seven family paralogs, inhibition by this MPT occurs mainly in the ? paralog and was observed as nuclear speckles. Silencing by shRNA of 14-3-3?, but not 14-3-3?, showed a significant increase in the transdifferentiation potential of 3T3-L1 preadipocytes. These results show that specifically 14-3-3? acts as a negative regulator of os-teogenesis and its inhibition by acetylation in K51 is one of the possible cellular mechanisms to bypass it.
Fil: Frontini López, Yesica Romina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
La familia de proteínas 14-3-3 constituye un componente esencial en la regulación de la ma-quinaria de señalización mediante proteínas fosforiladas en Ser/Thr. Consideradas redundan-tes, ubicuas y de niveles poco variables, han sido estudiadas de manera accesoria en varias vías de señalización. En la presente tesis, evaluamos la dinámica de inhibición por acetilación de su residuo esencial N-?-lisina 49/51 durante el proceso de diferenciación osteogénica de células madre mesenquimales humanas derivadas de tejido adiposo y en el ciclo celular. Pri-meramente medimos los niveles proteicos de los distintos parálogos de la familia durante la osteogénesis, observando un aumento en los niveles de los parálogos ? y ?, mientras que ? disminuyó. Asimismo, observamos un incremento en los niveles absolutos de 14-3-3AcK49/51 durante la diferenciación de las hASC y la fase S del ciclo celular. Entre los siete parálogos de la familia, la inhibición por aceilación se da principalmente en el parálogo ?. Esta proteína modificada presenta un patrón discreto nuclear en imágenes de microscopía. El silencia-miento mediante shRNA de 14-3-3?, pero no 14-3-3?, produjo un aumento significativo del potencial de transdiferenciación de preadipocitos 3T3-L1. Estos resultados demuestran que específicamente 14-3-3? actúa como regulador negativo de la osteogénesis y su inhibición por acetilación en la K51 es uno de los mecanismos celulares posibles para evitarla.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas