Improvement of bovine pestiviral diagnosis by the development of a cost-effective method for detecting viral RNA in fresh specimens and samples spotted in filter papers

Autores
Favaro, Paula Melisa; Molineri, Ana Ines; Dus Santos, Maria Jose; Calvinho, Fernando Luis; Pecora, Andrea
Año de publicación
2023
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión aceptada
Descripción
Bovine pestiviruses are the causative agents of bovine viral diarrhea, a disease thatcauses severe economic losses in cattle. The aim of this study was to improve their diagnosisby developing a RT-qPCR to detect bovine pestiviruses A, B and H; and to set up a protocolfor collecting, shipping and preserving bovine pestiviral RNA on filter papers. The developedRT-qPCR showed high sensitivity in detecting these viruses in different matrices: viral stocks,semen and serum samples. With regard to the possibility of using the technique to test serumpools, it was possible to identify a positive serum sample within a pool containing 30 sera.In addition to evaluating the qPCR from fresh samples, the use of filter papers to sow bovinesamples was analyzed. The sampling method on two different filter papers using bovine blooddrops was a useful alternative for diagnostic purposes and allowed to preserve pestiviral RNAfor up to 12 months under refrigeration.
Los Pestivirus bovinos son los agentes causales de la diarrea viral bovina, una enfermedad que genera importantes pérdidas económicas en el ganado vacuno. El objetivo de este trabajo fue mejorar su diagnóstico mediante el desarrollo de una RT-qPCR para detectar los Pestivirus bovinos A, B y H y diseñar un protocolo de recolección, envío y conservación de ARN viral en papeles de filtro. La RT-qPCR desarrollada demostró alta sensibilidad en la detección de estos virus en diferentes matrices: stock viral, suero y semen. Respecto de la posibilidad de usar la técnica para testear pools de suero, fue posible identificar un suero positivo dentro de un pool compuesto por 30 sueros. Además de evaluar la qPCR en muestras frescas, se analizó el uso de papeles de filtro para sembrar muestras de bovinos. La metodología de toma de muestras en dos tipos de papeles de filtro usando gotas de sangre fue una alternativa útil para el diagnóstico y permitió conservar ARN viral por hasta 12 meses a temperaturas de refrigeración.
EEA Rafaela
Fil: Favaro, Paula M. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina
Fil: Molineri, Ana Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela. Instituto de Investigación de la Cadena Láctea (IDICAL); Argentina
Fil: Molineri, Ana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigación de la Cadena Láctea (IDICAL); Argentina
Fil: Dus Santos, Maria J. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas (IVIT); Argentina
Fil: Dus Santos, Maria J. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Calvinho, Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela. Instituto de Investigación de la Cadena Láctea (IDICAL); Argentina
Fil: Calvinho, Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigación de la Cadena Láctea (IDICAL); Argentina
Fil: Calvinho, Luis. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina
Fil: Pecora, Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas (IVIT); Argentina
Fil: Pecora, Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fuente
Revista Argentina de Microbiología : 1-9 (Available online 17 January 2023)
Materia
Diagnosis
Bovine Diarrhoea Pestivirus
Animal Diseases
Diagnóstico
Pestivirus de la Diarrea Bovina
Enfermedades de los Animales
Bovine Pestiviruses
Filter Papers
RT-qPCR
Bovine Viral Diaorrhea
Pestivirus de Bovinos
Papeles de Filtro
Diarrea Viral Bovina
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
Repositorio
INTA Digital (INTA)
Institución
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
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With regard to the possibility of using the technique to test serumpools, it was possible to identify a positive serum sample within a pool containing 30 sera.In addition to evaluating the qPCR from fresh samples, the use of filter papers to sow bovinesamples was analyzed. The sampling method on two different filter papers using bovine blooddrops was a useful alternative for diagnostic purposes and allowed to preserve pestiviral RNAfor up to 12 months under refrigeration.Los Pestivirus bovinos son los agentes causales de la diarrea viral bovina, una enfermedad que genera importantes pérdidas económicas en el ganado vacuno. El objetivo de este trabajo fue mejorar su diagnóstico mediante el desarrollo de una RT-qPCR para detectar los Pestivirus bovinos A, B y H y diseñar un protocolo de recolección, envío y conservación de ARN viral en papeles de filtro. La RT-qPCR desarrollada demostró alta sensibilidad en la detección de estos virus en diferentes matrices: stock viral, suero y semen. 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Dus Santos et al., Improvement of bovine pestiviral diagnosis by the development of a cost-effective method for detecting viral RNA in fresh specimens and samples spotted in filter papers, Revista Argentina de Microbiología, https://doi.org/10.1016/j.ram.2022.10.0020325-7541https://doi.org/10.1016/j.ram.2022.10.002Revista Argentina de Microbiología : 1-9 (Available online 17 January 2023)reponame:INTA Digital (INTA)instname:Instituto Nacional de Tecnología Agropecuariaenginfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International (CC BY-NC-SA 4.0)2025-09-29T13:45:58Zoai:localhost:20.500.12123/14582instacron:INTAInstitucionalhttp://repositorio.inta.gob.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://repositorio.inta.gob.ar/oai/requesttripaldi.nicolas@inta.gob.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:l2025-09-29 13:45:58.993INTA Digital (INTA) - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuariafalse
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Los Pestivirus bovinos son los agentes causales de la diarrea viral bovina, una enfermedad que genera importantes pérdidas económicas en el ganado vacuno. El objetivo de este trabajo fue mejorar su diagnóstico mediante el desarrollo de una RT-qPCR para detectar los Pestivirus bovinos A, B y H y diseñar un protocolo de recolección, envío y conservación de ARN viral en papeles de filtro. La RT-qPCR desarrollada demostró alta sensibilidad en la detección de estos virus en diferentes matrices: stock viral, suero y semen. Respecto de la posibilidad de usar la técnica para testear pools de suero, fue posible identificar un suero positivo dentro de un pool compuesto por 30 sueros. Además de evaluar la qPCR en muestras frescas, se analizó el uso de papeles de filtro para sembrar muestras de bovinos. La metodología de toma de muestras en dos tipos de papeles de filtro usando gotas de sangre fue una alternativa útil para el diagnóstico y permitió conservar ARN viral por hasta 12 meses a temperaturas de refrigeración.
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