Análisis de plantas transgénicas ATEMYB32::IPT de pasto miel (Paspalum dilatatum Poir.) una gramínea C4

• Autores: Viñas, Ezequiel Santiago
• Año de publicación: 2015
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Schrauf, Gustavo Enrique; Ghio, Sergio Claudio
• Materia: IPT; PASPALUM; CITOCININAS; TRANSGEN; ATEMYB32; IPT; PASPALUM; CYTOKININS; TRANSGENE; ATEMYB32
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En plantas forrajeras como Paspalum dilatatum Poir, la senescencia foliar es un procesoque afecta su producción y especialmente su calidad. Una estrategia molecular pararetrasar la senescencia mediante la ingeniería genética se basa en la expresión de lasecuencia codificante de la isopentenil transferasa (IPT), enzima clave en la biosíntesisde citoquininas. Para lograrlo se utilizan promotores con expresión no constitutiva quepermitan la producción autorregulada de citoquininas. Se analizó el efecto de laincorporación vía transgénesis de las construcción quimérica ATEMYB32::IPT enclones de Paspalum dilatatum cv “Relincho”. Se estudiaron 8 eventos obtenidosmediante transformación biolística con controles isogénicos, dos provenientes decultivo de tejido que no incorporaron al transgén después de la transformación biolísticay uno de campo. Los individuos fueron propagados vegetativamente para generarréplicas que permitieron estimar la respuesta de los eventos a diferentes condiciones deestrés abiótico (deficiencias hídricas y temperaturas bajas extremas). Se realizaronanálisis moleculares, PCR para amplificar el transgén ipt, complementándose estainformación con la medición del nivel de citocininas y auxinas por HPLC. Secaracterizaron a las líneas transgénicas desde su comportamiento germinativo, suanatomía foliar y la ultraestructura de los cloroplastos. En todas las plantas ensayadas seestimó el contenido de clorofila, azúcares, proteínas totales y actividad de la enzima SOD. Se halló un mayor nivel de citocininas y de la relación citocininas/auxinas enplantas transgénicas respecto a las controles y variabilidad entre los eventos analizados. A niveles anatómico y ultraestructural se encontraron características distintivas de laslíneas transgénicas. Además algunos de los eventos obtenidos mostraron una mayorresistencia a ambas condiciones de estrés y un mejor comportamiento germinativo. Segeneraron conocimientos para comprender el efecto de la incorporación del transgén ATEMYB32::IPT en especies C4.
Leaf senescence is a process that affects the production and quality of fodder plant suchas Paspalum dilatatum Poir. In order to delay the senescence, there is a molecularstrategy which consists on using genetic engineering. It uses the sequence encodingisopentenyl transferase (IPT), a key enzyme in the biosynthesis of cytokinins. Promoterwith expression non constitutive are used to allow the self –regulated production ofcytokinin. The effect of incorporation of transgenesis via ATMYB32::IPT chimericconstruct was analyzed in clones of Paspalum dilatatum cv " Relincho ". Eight eventsobtained by biolistic transformation and isogenic controls were studied. Two of themcame from tissue culture with transformation biolistic which they did not incorporate tothe transgenic after the biolistic conversion and also a third coming form field. Theindividuals were spread in a vegetative way to obtain replicates for estimating theresponse of different events under abiotic stress conditions (water deficits and frost). Inaddition, molecular analyzes were performed PCR to amplify the ipt transgene. Thisinformation was complemented with measures of cytokinins and auxins by HPLC. Transgenic Lines were characterized considering the germination behaviour, leafanatomy and chloroplast ultrastructure. Content of chlorophyll, sugars, total protein and SOD enzyme activity was estimated in all plants under analysis. Higher levels ofcytokinins were found in transgenic plants compared to the controls and variation in theanalyzed events. Distinctive features of the transgenic lines were found in the anatomicand ultrastructural level. Furthermore some of the obtained events showed a higherresistance to stress conditions and a better germination behavior. Knowledge wasdeveloped in order to understand the effect produced by the incorporation of thetransgene ATMYB32::IPT in C4 specie.
Fil: Viñas, Ezequiel Santiago. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.