Las células madre pluripotentes son propagadas en un medio de cultivo novedoso que preserva sus propiedades fundamentales y aumenta su proliferación, asociada a la presencia de una...

• Autores: Losino, Noelia Ivana
• Año de publicación: 2013
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Guberman, Alejandra Sonia
• Materia: CELULAS MADRE EMBRIONARIAS; CELULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS; AUTO-RENOVACION; PLURIPOTENCIA; PROLIFERACION; MEDIO CONDICIONADO; FIBRONECTINA; EMBRYONIC STEM CELLS; INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS; SELF-RENEWAL; PLURIPOTENCY; PROLIFERATION; CONDITIONED MEDIUM; FIBRONECTIN
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Las células madre (CM) pluripotentes, entre ellas, las CM embrionarias (CME) y CMpluripotentes inducidas (CMPI) son capaces de propagarse indefinidamente en cultivo y dediferenciarse a todos los tipos celulares del organismo. Encontramos un medio de cultivoque permite su propagación, preservando sus propiedades básicas, evaluadas por análisis deexpresión de marcadores y diferenciación in vitro e in vivo; y aumentando paralelamente suproliferación. Este medio es condicionado por una línea celular de granulosa bovina,mitogénico sobre otros tipos celulares, adjudicándose dicho efecto a la fibronectina (FN) queincluye el exón EDA (FN+EDA). En este contexto, decidimos analizar si esta isoforma de FN aumenta la proliferación de las CME. Estudiamos los niveles de proliferación de las CME en presencia de EDA exógeno, mediante dos estrategias. Utilizamos medioscondicionados por líneas de fibroblastos embrionarios de ratón genéticamente modificadas,que secretan sólo FN+EDA, FN sin EDA o ambas isoformas. Por otra parte, evaluamos elefecto de un péptido correspondiente a una porción de FN que incluye o no dicho exón. Entodos los casos, observamos que la presencia de este dominio produjo un aumento en laproliferación en CME de ratón y humanas, evaluada por MTT, cristal violeta y ensayos desanado de herida. Esperamos que nuestros hallazgos contribuyan al conocimiento de losmecanismos moleculares involucrados en la proliferación de CM y a la optimización de suscondiciones de cultivo.
Pluripotent stem cells, which include Embryonic Stem Cells (ESC) and induced Pluripotent Stem Cells (iPSC) can be propagated indefinitely in culture and are able to differentiate intoall cell types of the organism. We found a culture medium that allows their propagation,preserving their basic properties, evaluated by analysis of marker gene expression and invitro and in vivo differentiation protocols. This medium also increased pluripotent stemcell's proliferation. This is a medium conditioned by a bovine granulosa cell line, previouslyreported to be mitogenic for other cell types, ascribing this effect to fibronectin (FN)containing EDA exon (FN+EDA). In this context, we decided to study if this FN isoformincreases the proliferative rate of ESC. We studied the mitogenic effect on ESCs in thepresence of exogenous EDA, by two strategies. We used conditioned media from geneticallymodified lines of mouse embryonic fibroblasts that secrete only FN+EDA, FN without EDAor both isoforms. Furthermore, we evaluated the effect of a peptide corresponding to aportion of FN comprising or not EDA exon. In all cases, we observed that the presence ofthis domain resulted in an increase in the proliferation rate of both mouse and human ESC,assessed by MTT, crystal violet, and wound healing assays. We hope that our findingscontribute to the understanding of the molecular mechanisms involved in the proliferation ofpluripotent stem cells and optimization of culture conditions.
Fil: Losino, Noelia Ivana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.