Acción de la homocisteína sobre el sistema hemostático

• Autores: Quintana, Irene Luisa
• Año de publicación: 2003
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Kordich, Lucía Clelia
• Materia: HOMOCISTEINA; SISTEMA HEMOSTATICO; VALORES DE CORTE; MTHFR; REDES DE FIBRINA; TROMBOSIS; HOMOCYSTEINE; HAEMOSTATIC SYSTEM; CUT-OFF VALUES; MTHFR; FIBRIN NETWORKS; THROMBOSIS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Numerosos estudios epidemiológicos han postulado que concentraciones plasmáticas elevadasde homocisteína (Hcy) constituyen un factor de riesgo independiente para la enfermedadvascular oclusiva, a nivel arterial y venoso. Aún no están esclarecidos los mecanismosfisiopatológicos involucrados en esta asociación. Los objetivos principales de esta tesis fueron: - Evaluar los niveles plasmáticos de Hcy en diversos grupos poblacionales, con unmétodo analítico accesible y confiable. - Analizar determinantes genéticos y adquiridos de la homocisteinemia. - Determinar los valores de corte para homocisteinemia. - Estudiar la asociación de la variante termolábil de la MTHFR con la trombosis. - Evaluar la relación entre hiperhomocisteinemia y componentes del sistema hemostático. - Postular mecanismos responsables de la acción trombogénica de la Hcy. Para la determinación de la homocisteinemia en los estudios epidemiológicos realizados, seutilizó una técnica de ELISA, cuya validación arrojó resultados precisos y equivalentes a los delmétodo de referencia (HPLC). Las muestras más apropiadas para ser analizadas fueron losplasmas en EDTA o los sueros obtenidos con gel separador, comprobándose que loscongelamientos y descongelamientos sucesivos no afectan los resultados. Los valores dehomocisteinemia de la población de Buenos Aires resultaron comprendidos entre 5,0-19,2 μM (3a 59 años de edad); 1,2-11,6 μM (neonatos) y 6,0-30 μM (>65 años). Estos resultados no debenconsiderarse como valores de referencia; por el contrario, en el análisis de valores de corte sedeterminó que el nivel plasmático óptimo de Hcy debe ser S«12 μM. Se observó una prevalencia elevada de hiperhomocisteinemia (HHcy), sugiriendo queaproximadamente el 50 % de nuestra población estaría expuesta a un mayor riesgo deenfermedad vascular. Los niveles de Hcy se incrementaron con la edad de los individuos yresultaron mayores en los hombres que en las mujeres. Se demostró que existe una estrecharelación entre la homocisteinemia y los niveles de ácido fólico, vitamina B12 y creatinina. Enparticular, se observó que la restricción dietaria de folatos aumenta significativamente los nivelesde Hcy, mientras que una dieta que aporte 400 μg/día de ácido fólico disminuye notablemente lahomocisteinemia. Entre los factores genéticos que podrían afectar la concentración de Hcy se estudió elpolimorfismo C677T de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR). Se observó que sólo lacondición de homocigosis de la mutación se asociaría a niveles aumentados de Hcy. La HHcy resultó factor de riesgo independiente para la trombosis venosa, mientras que lapresencia T677T/MTHFR no se asociaría a esta patología. En individuos hiperhomocisteinémicos mayores de 65 años se detectaron nivelessignificativamente aumentados de factor von Willebrand y de dermatán sulfato, probablementeasociados a una disfunción endotelial. Componentes del sistema hemostático tales como las plaquetas, los factores del sistema decoagulación y la fibrinolisis no mostraron alteraciones en presencia de altas concentraciones de Hcy, cuando fueron evaluados mediante pruebas del laboratorio de hemostasia. Sin embargo, enlas experiencias de fibrinoformación se evidenciaron efectos importantes de la Hcy sobre laestructura de la red de fibrina. Se obtuvieron redes compactas, gruesas y muy ramificadas, quegenerarían coágulos más resistentes a la fibrinolisis. En estos resultados estaría involucrado elgrupo tiol de la Hcy y uno de los componentes afectados en la fibrinoformación sería el factor XIII. Los hallazgos enunciados constituyen un nuevo aporte para el esclarecimiento de losmecanismos implicados en el efecto trombogénico de la hiperhomocisteinemia.
Several clinical and epidemiological studies have postulated that a high plasma homocysteine (Hcy) concentration is an independent risk factor for occlusive vascular diseases. The precisephysiologic mechanisms of Hcy-associated atherothrombosis remain unclear. Main objectives inthe present thesis were: - To evaluate plasma Hcy levels with a reliable method in various populations. - To analyze genetic and acquired determinants of homocysteinemia. - To propose homocysteinemia cut-off values. - To study the relation between the thermolabile MTHFR variant and thrombosis. - To evaluate hyperhomocysteinemia-haemostatic system interactions. - To postulate mechanisms involved in the thrombogenic effects associated to Hcy. Validation of an ELISA for the determination of plasma Hcy levels was performed. The methodprovided reliable data and showed agreement with HPLC. The most adequate samples were EDTA plasmas and serum obtained with gels. Frosting and defrosting procedures did not affectsamples’ stability. The population of Buenos Aires showed a range of homocysteinemia between 5.0-19.2 μM (ages 3-59 years); 1.2-11.6 μM (newborns) and 6.0-30.0 μM(> 65 years old). These results must not beconsidered as reference values. On the contrary, homocysteinemia cut-off was 12 μM. Plasma Hcy concentration increased with age and was higher for male than for female. Homocysteinemia correlated inversely with folic acid and Vitamin B12 levels and positively withserum creatinine levels. Individuals with dietary restriction of folates showedhyperhomocysteinemia; meanwhile a diet providing 400 μg folic acid/day significantlydiminished Hcy concentration. Polymorphism C677T of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) study showed anassociation of the homozygous mutant genotype with increased plasma Hcy. Hyperhomocysteinemia resulted in an independent risk factor for venous thrombosis, but MTHFR677TT would not show an enhancement of the thrombotic events. In elderly hyperhomocysteinemic subjects high factor von Willebrand and dermatan sulphatelevels were measured. Probably, these results would be associated to an endothelial dysfunctionin this population. Platelets, coagulation factors and fibrinolysis did not seem to be affected by high Hcyconcentrations in laboratory tests. However, fibrinformation in vitro studies showed a significant Hcy-associated effect. Fibrin networks were different from control, with shorter, thicker andmore branched fibers, resulting in a more compact structure. These changes would make clotsmore resistant to fibrinolysis. The thiol group would be involved in this effect and probably,factor XIII could be altered. These findings represent a new contribution to the knowledge about mechanisms involved inthe thrombogenic effects associated with hyperhomocysteinemia.
Fil: Quintana, Irene Luisa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.