Diferencias estacionales en la inhibición de la enzima fosfolipasa A2 del veneno de Bothrops diporus por extractos de cissampelos pareir

• Autores: Ricciardi Verrastro, Bárbara Verónica; Dellacassa, Eduardo Santiago; Torres, Ana María
• Año de publicación: 2014
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: documento de conferencia
• Materia: Actividad hemolítica; Actividad alexitérica; Fitoquímica
• Institución: Universidad Nacional del Nordeste

Fil: Ricciardi Verrastro, Bárbara Verónica. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina.
Fil: Dellacassa, Eduardo Santiago. Universidad de la República. Laboratorio de Biotecnología de Aromas; Uruguay.
Fil: Torres, Ana María. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura, Argentina.
Cissampelos pareira L. (Menispermaceae), conocida como mil hombres, contrayerba, abuta, es un arbusto trepador muy utilizado en etnomedicina. Trabajos anteriores del grupo de investigación, han comprobado que el extracto alcohólico de sus partes aéreas inhibe la acción de la fosfolipasa A2 (PLA2) del veneno de yarará chica (B. diporus). Este resultado es importante, porque PLA2 induce la desestabilización in vivo de las membranas celulares con pérdida selectiva de la permeabilidad a iones Ca+2, contribuyendo a la letalidad y necrosis producida por el veneno, por lo que su inhibición es fundamental en la búsqueda de un posible tratamiento del accidente ofídico. En este trabajo se estudia la capacidad inhibitoria de los extractos de C. pareira obtenidos en distintos estados vegetativos sobre la PLA2 del veneno de B. diporus, de forma de determinar el mejor momento para la recolección del material vegetal a ser utilizado. Se procesaron muestras de C. pareira procedentes de Corrientes (San Cosme, 27º 22´58,6´´ S; 58º 34´56,4´´ W; elevación 65m) en dos estaciones diferentes: otoño I (material estéril) y primavera II (en flor). Se depositó un ejemplar en el herbario CTES. Por maceración del material vegetal se obtuvieron extractos acuosos (1), alcohólicos (2) y hexánicos (3) tanto de partes aéreas (A) como de raíces (R). Se realizó un screening de la actividad alexitérica por SDS-PAGE usando geles de separación al 12%, y de stacking al 4%. Se comprobó la actividad inhibitoria de los extractos sobre la hemólisis in vitro, mediante placas de agar sangre-fosfatidilcolina, considerando que el halo hemolítico producido es directamente proporcional a la actividad de fosfolipasa A2. Posteriormente se realizó el estudio fitoquímico del extracto más activo por cromatografía en placa delgada (TLC), utilizando como revelador anisaldehido-ácido sulfúrico (revelador universal). De los doce extractos ensayados por SDS-PAGE, se observó mayor actividad en A2 II, con un borramiento total de bandas, incluyendo la correspondiente a la PLA2. Los resultados de la difusión radial en agar sangre fosfatidilcolina demostraron que A2 II inhibe la PLA2 en un 100% para una relación veneno-extracto 1:20, mientras que el extracto A2 I resultó ineficaz para inhibir la actividad enzimática a esa dosis. Se analizaron además distintas relaciones venenoextracto, observándose que la actividad en primavera resultó dependiente de la dosis. Para las relaciones venenoextracto 1:5, 1:10, 1:20 y 1:40 se obtuvieron respectivamente porcentajes de inhibición 74%, 83% y 100% para los últimos dos. El análisis por TLC (silica gel GF) utilizando acetato de etilo-metanol (1:1) como fase móvil, revelada con anisaldehidoácido sulfúrico, mostró diferencias en la composición química de ambos extractos, siendo más significativa la presencia de una mancha roja en el punto de siembra de A2 II, pero ausente en A2 I. En resumen, los extractos alcohólicos de C. pareira presentaron variación estacional en la capacidad de inhibir a la enzima PLA2, siendo activos solo en primavera, por lo cual se debería aconsejar la recolección de la especie en esta estación y la utilización del extracto alcohólico de partes aéreas. La presencia de una fracción diferente en el análisis por TLC determina que se deba trabajar en el estudio de la composición de esta fracción de modo de identificar, y cuantificar los posibles metabolitos activos contra la PLA2 de este extracto.