Estandarización de métodos moleculares para la identificación de hongos y su aplicación en estudios epidemiológicos

• Autores: Spesso, María Florencia
• Año de publicación: 2012
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Masih, Diana Teresa; Smania, Andrea María; Chiapello, Laura Silvina; Di Genaro, María Silvia
• Materia: Dermatofitos; Dermatoglifia del ADN; Reacción en Cadena de la Polimerasa; Tiña; Epidemiología; Micosis
• Institución: Universidad Nacional de Córdoba

Tesis (Magister en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2012.
Fil: Spesso, María Florencia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.
Los dermatofitos son hongos keratinofílicos de los géneros Trichophyton, Microsporum and Epidermophyton y son los agentes causales más frecuentes de infecciones fúngicas en todo el mundo, con una prevalencia global estimada en un 20%. En Argentina, la información disponible sobre la incidencia de estas micosis es fragmentaria y geográficamente limitada. En la provincia de Córdoba, no hay reportes publicados de la epidemiología de las micosis cutáneas y se desconoce el impacto de estas enfermedades en la población, así como las especies de hongos más frecuentes. Además, no se dispone de un método molecular para la identificación de dermatofitos para estudios epidemiológicos de diversas especies. El objetivo general de esta tesis fue determinar la epidemiología de las micosis cutáneas en el Hospital Pediátrico del Niño Jesús y estandarizar métodos moleculares para la identificación y epidemiología de los dermatofitos. Con este propósito, se plantearon los siguientes objetivos específicos: - Realizar un estudio epidemiológico clásico de las micosis cutáneas en el Hospital Pediátrico del Niño Jesús (Córdoba, Argentina). II- Estandarizar técnicas de PCR fingerprinting utilizando los primers que hibridan con secuencias mini y microsatélite (GACA)4, (GTG)5 y M13, para identificar especies de dermatofitos. III- Estandarizar técnicas de PCR fingerprinting utilizando los primers que hibridan con secuencias al azar, OPI 07 y OPK 20, para detectar variabilidad intraespecie en cepas de Microsporum canis y evaluar su aplicación en estudios epidemiológicos moleculares. Los resultados demuestran que sobre un total de 894 pacientes con sospecha clínica de micosis cutáneas del Hospital Pediátrico del Niño Jesús, se confirmó la presencia de infección fúngica en el 33,7 % (n=302) de los casos. Las dermatofitosis fueron las infecciones fúngicas más frecuentes (78,7%; n=237) y los dermatofitos más frecuentes aislados en cultivo fueron Microsporum canis (53%, n91) y Trichophyton rubrum (10%, n=17). De los dermatofitos recuperados en cultivo (n=144), un 9,7% (n=14) no pudieron ser identificados en género y especie por los métodos micológicos clásicos. Estos cultivos sin identificar representaron el 54 % (n=1 3) de los cultivos positivos para dermatofitos (n=24) de las onicomicosis. Las formas clínicas más importantes fueron la tiña de la cabeza (40%) y las onicomicosis (36%). Por otra parte, se demuestra que la aplicación secuencia¡ de PCR fingerprinting con (GACA)4 y (GTG)5 es un método rápido y sencillo para identificar 6 especies de los dermatofitos más frecuentes en nuestro medio: M. canis, M. gypseum, T rubrum, T mentagrophytes., T tonsurans y 7T interdigitale. Además, la aplicación de PCR con los primers OPI 07 y OPK 20 evidenció la presencia de variabilidad genética en 35 cepas de Microsporum canis observándose una distribución geográfica restringida en uno de los dos genotipos detectados por PCR con OPK 20 En conclusión, en esta tesis se definió la epidemiología de las micosis cutáneas en el Hospital Pediátrico del Niño Jesús, se estandarizó una metodología molecular (PCR fingerprinting con (GACA)4 y (GTG)5) para la identificación de hongos dermatofitos que causan las infecciones más frecuentes en nuestro medio; y finalmente se estandarizó una PCR fingerprinting con primers que hibridan secuencias al azar para la detección de variabilidad genética en cepas de Microsporum canis. Esta metodología podría aplicarse a estudios epidemiológicos moleculares para determinar nichos ecológicos o establecer las cepas causantes de un brote epidémico.
Fil: Spesso, María Florencia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.