Efecto de ácidos grasos poliinsaturados en la regulación de la expresión de TP53 mediada por miRNAS en la tumorigénesis de mucosa oral

• Autores: Don, Julieta Aldana
• Año de publicación: 2025
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Pasqualini, María Eugenia; Brunotto, Mabel; https://orcid.org/0009-0000-0534-6658
• Materia: Ácidos Grasos Poliinsaturados; Ácidos Grasos Omega-3; Ácidos Grasos Omega-6; Pri-miR-34 b/c; TP53; DMBA; Displasia epitelial lingual
• Institución: Universidad Nacional de Córdoba

119 p.
Tesis - Doctorado en Ciencias de la Salud - Universidad nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaría de Graduados en Ciencias de la Salud, 2025.
Fil: Don, Julieta Aldana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Odontología; Argentina.
Introducción: El carcinoma oral de células escamosas (OSCC, por sus siglas en inglés) es una enfermedad multifactorial que frecuentemente está precedida por trastornos orales potencialmente malignos (OPMD) y displasia epitelial oral (OD). Las investigaciones recientes han revelado que la interacción entre variantes genéticas específicas (TP53R72P y hsa-pri-miR-34b/c) y patrones dietéticos con alto contenido de grasas saturadas y poli-insaturadas (PUFAs) aumenta significativamente el riesgo de desarrollar OPMD y OSCC. Además de las variantes genéticas específicas, se ha observado que la desregulación de microRNAs (miRNAs), especialmente de la familia miR-34 —regulada por p53—, está estrechamente vinculada con la progresión de la carcinogénesis debido a su función como supresor tumoral, aunque los mecanismos biológicos y moleculares subyacentes aún no han sido completamente elucidados. Objetivo: evaluar el efecto modulador de los PUFAs ω-3 y ω-6, sobre la expresión de TP53 y miR-34, en el desarrollo de OD, en modelos experimentales in vivo e in vitro. Metodología Se realizaron experimentos in vivo e in vitro. Experimentos in vitro: Células DOK (1x104 - 5x105 ) fueron incubadas con el ácido araquidónico (AA, ω-6), eicosapentaenoico (EPA, ω-3), docosahexaenoico (DHA, ω-3) (10-200 µM) o controles (etanol y medio de cultivo) y se analizaron: viabilidad (ensayo resazurina), migración (ensayo de herida), perfil lipídico de membrana (cromatografía de gas, GC), genotipo de TP53 y hsa-pri-miR-34b/c (PCR) y expresión de hsa-miR-34 (RT-qPCR). Experimentos in vivo: Ratones BALB-c fueron tratados con dimetilbenz(a)antraceno (DMBA) para la inducción tumoral del tejido lingual y alimentados con dietas enriquecidas con dos clases de aceites: maíz (rico en omega-6) o pescado (bacalao; rico en omega-3) durante 30, 60 o 90 días Se analizaron la histopatología (H/E), expresión de Ki-67 y p53 (inmunomarcación), perfil lipídico de membrana (GC), mutaciones de TRP53 (PCR) y expresión de mmu-pri-miR-34b/c (RT-qPCR). Resultados: In vitro, EPA y DHA disminuyeron la viabilidad de células DOK en todas las concentraciones, mientras que el AA aumentó la migración; y mostró una mayor relación ω6/ω3 en el perfil lipíco. No se observaron cambios significativos en el genotipo de TP53 y hsa-pri-miR-34b/c; sin embargo, la expresión de hsa-miR-34a fue significativamente mayor en las células tratadas con DHA y EPA en comparación con el control y AA. In vivo, los ratones alimentados con ω-6 mostraron un mayor porcentaje de displasias e inmunotinción de Ki67 en comparación con aquellos alimentados con ω3. Además, presentaron valores promedio significativamente elevados de AA, mientras que el grupo alimentado con dieta pescado mostró valores promedio sustancialmente más altos de EPA y DHA en las membranas celulares del tejido lingual. El mmu-primiR-34 b/c estuvo sobre-expresado en los animales alimentados con aceite de pescado y de maíz, a los 30 y 90 días respectivamente. Conclusiones: Los omega-3 demostraron disminuir la viabilidad y migración de las células DOK, así como la progresión de lesiones displásicas in vivo inducidas por DMBA, evidenciado por una menor inmunomarcación de Ki67 y p53 y una expresión temprana del supresor tumoral mmu-pri-miR-34b/c, destacando su papel como moduladores de procesos celulares clave relacionados con la progresión de lesiones cancerígenas. Debido a ello, se recomienda incrementar el consumo de alimentos ricos en omega-3 para prevenir características similares a la displasia de la mucosa, especialmente en pacientes fumadores. Estas observaciones refuerzan la importancia de considerar los PUFAs como factores dietarios relevantes en estrategias de prevención y tratamiento.
Introduction: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a multifactorial disease often preceded by potentially malignant oral disorders (OPMD) and oral epithelial dysplasia (OD). Recent research has revealed that the interaction between specific genetic variants (TP53R72P and has-pri-miR-34b/c) and dietary patterns high in saturated and polyunsaturated fats (PUFAs) significantly increases the risk of developing OPMD and OSCC. In particular, the deregulation of microRNAs (miRNAs), especially the miR-34 family—regulated by p53—has been closely linked to the progression of carcinogenesis due to its function as a tumor suppressor, although the underlying biological and molecular mechanisms have not yet been fully elucidated. Objective: evaluate the modulatory effect of ω-3 and ω-6 PUFAs on TP53 and miR-34 expression in the development of OD, using in vivo and in vitro experimental models. Methodology Experiments were conducted in both in vivo and in vitro models. In vitro experiments: DOK cells (1x10⁴ - 5x10⁵) were incubated with arachidonic acid (AA, ω-6), eicosapentaenoic acid (EPA, ω-3), docosahexaenoic acid (DHA, ω-3)(10-200 µM), or control conditions (ethanol and culture medium). Cell viability (resazurin assay), migration (wound assay), membrane lipid profile (gas chromatography, GC), TP53 and has-pri-miR-34b/c genotyping (PCR), and has-miR-34 expression (RT-qPCR) were analyzed. In vivo experiments: BALB/c mice were treated with 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) in order to induce tumor formation in lingual tissue, and fed diets enriched with two types of oils: corn oil (rich in omega-6) or fish oil (cod; rich in omega-3) for 30, 60, or 90 days. Histopathology (H&E), Ki-67 and p53 expression (immunostaining), membrane lipid profile (GC), TRP53 mutations (PCR), and mmu-pri-miR-34b/c expression (RT-qPCR) were analyzed. Results: In vitro, EPA and DHA decreased DOK cell viability at all concentrations, whereas AA increased migration and showed a higher ω-6/ω-3 ratio. No significant changes were observed in TP53 and has-pri-miR-34b/c genotyping; however, miR-34a expression was significantly higher in cells treated with DHA and EPA compared to the control and AA. In vivo, mice fed ω-6 diets exhibited a higher percentage of dysplasia and greater Ki-67 immunostaining compared to those fed ω-3 diets. Additionally, they presented significantly higher mean values of AA, while the fish oil-fed group showed substantially higher mean EPA and DHA levels in the lingual tissue cell membranes. mmu-pri-miR-34b/c was overexpressed in animals fed fish and corn oil at 30 and 90 days, respectively. Conclusions: Omega-3 fatty acids have been shown to decrease the viability and migration of DOK cells, as well as the progression of in vivo DMBA-induced dysplastic lesions. This is evidenced by lower immunostaining of Ki67 and p53 and an early expression of the tumor suppressor mmu-pri-miR-34b/c, highlighting their role as modulators of key cellular processes related to cancerous lesion progression. Therefore, increasing the consumption of omega-3-rich foods is recommended to prevent mucosal dysplasia-like characteristics, especially in smokers. These observations reinforce the importance of considering PUFAs as relevant dietary factors in prevention and treatment strategies.
2027-08-21
Fil: Don, Julieta Aldana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Odontología; Argentina.