Relaciones genotipo-fenotipo en Hemofilia. Desarrollo de un esquema de análisis molecular para mejorar la atención médica de las familias con Hemofilia

• Autores: Marchione, Vanina Daniela
• Año de publicación: 2019
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: De Brasi, Carlos Daniel; Varela, Viviana; Rossetti, Liliana Carmen; Cerrone, Gloria Edith; Rossetti, María Victoria; Blanco, Alicia
• Materia: Hemofilia; F8; Genotipo-Fenotipo; Inhibidor; Algorítmo molecular; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Haemophilia is a key disease to study human genetics.\nThe objectives of the work are to improve the molecular diagnostic tools and contribute to the\nknowledge of the genotype-phenotype relationship in Haemophilia A (HA).\nTo improve the determination of the causal defect, a scheme including F8-analysis and\npathogenicity assignment was developed and adjusted, allowing characterization 96% of the\nfamilies with HA (n=911 individuals).\nA family with HA and a deletion of the F8-promoter (Del2kb) was reported: a severe proband, a\ncarrier mother, a non-carrier aunt, and a mild grandfather (FVIII:C=35%) showing a combined\nsomatic/germinal mosaicism. An allele-specific qPCR approach for Del2KB, on bloodmesoderm/\nsaliva-ectoderm/urine-endoderm, allowed inferring the production of FVIII in\nhepatocytes-endoderm (Normal%?34%) and gonads-epiblast (Del2kb%?60%) in the mosaic in\nclose coincidence with his phenotype.\nCase-control studies in HA-severe patients (n=404) allowed determination of absolute inhibitor\nrisks differing from the average (18%) associated with some F8-genotypes: multi-exonic\ndeletions (86.9%, P=0.0006), -intron 22 inversion (24.7%, P=0.0011) and -missense (1.2%,\nP<0.0001). Studies in affected siblings showed additional inhibitor-predisposing factors. Studies\non immunoregulatory genes indicated high inhibitor risks for the variant CTLA4:p.Thr17Ala\n(OR=2.11, P=0.0025).\nThese findings contribute to improve and extend the medical care of the patient with HA and\nhis family.
Fil: Marchione, Vanina Daniela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
La Hemofilia es una enfermedad clave para estudiar la genética humana.\nLos objetivos del trabajo son mejorar las herramientas moleculares diagnósticas y aportar al\nconocimiento de la relación genotipo-fenotipo en Hemofilia A (HA).\nPara mejorar la determinación del defecto causal, se desarrolló y ajustó un esquema de análisis\ndel F8 y asignación de patogenicidad, que permitió caracterizar el 96% de las familias con HA\n(n=911 individuos).\nSe reportó una familia con HA, con una deleción del promotor del F8 (Del2kb): probando severo,\nmadre portadora, tía no-portadora, y abuelo leve (FVIII:C=35%) mostrando un mosaico genético\n(somático/germinal). Un abordaje qPCR alelo-específico para Del2KB, sobre sangremesodermo/\nsaliva-ectodermo/orina-endodermo, permitió inferir la producción de FVIII en\nhepatocitos-endodermo (Normal%?34%) y gónadas-epiblasto (Del2kb%?60%) del mosaico, en\ncoincidencia con su fenotipo.\nEstudios caso/control en pacientes HA-severos (n=404) permitió determinar riesgos absolutos\nde inhibidor distintos del promedio (18%) para los genotipos del F8: -deleciones multi-exónicas\n(86,9%, P=0,0006), -inversión intrón 22 (24,7%, P=0,0011) y -missense (1,2%, P<0,0001). Estudios\nen hermanos afectados indicaron factores predisponentes de inhibidor fuera del F8. Estudios\nsobre genes inmunoreguladores indicaron alto riesgo de inhibidor para la variante\nCTLA4:p.Thr17Ala (OR=2,11, P=0,0025).\nEstos hallazgos aportan a mejorar y extender la atención médica del paciente con HA y su familia.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias de la Salud