Evaluación del ADN espermático de llamas utilizando azul de toluidina.

• Autores: Carretero, M.I.; Giuliano, S.M.; Casaretto, C.I.; Gambarotta, M.C.; Neild, D.M.
• Año de publicación: 2009
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: artículo
• Fuente: InVet, vol. 11, nº1
• Materia: ADN espermático; azul de toluidina; llama; sperm DNA; toluidine blue; llama
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Toluidine blue stain (TB) binds to DNA, allowing differentiation of spermatozoa according to the degree of chromatin condensation. The objectives of this study were to adapt a technique for evaluating sperm chromatin in llamas, determine chromatin condensation patterns in llamas using TB and determine if it is possible to use dithiothreitol (DTT) as a positive control for the stain. Two fixation times with ethanol 96° (2 and 30 minutes) and 3 incubation times with 1% DTT (30 s, 1.5 min and 3 min) were studied. Staining patterns observed were: light blue (negative, without alteration in the normal chromatin condensation), light violet (intermediate, some degree of decondensation), dark violet (positive, high degree of decondensation). No significant differences were observed between fixation times, either in samples with or without DTT. To conclude, it was possible to simplify the TB stain and determine the different patterns in llama spermatozoa. It was proved that incubation with DTT can be used as a positive control for the stain and to evaluate individual susceptibility to decondensation in vitro.
Fil: Carretero, M.I. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Área de Teriogenología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Giuliano, S.M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Área de Teriogenología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Giuliano, S.M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Física Biológica. Buenos Aires, Argentina
Fil: Casaretto, C.I. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Área de Teriogenología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Gambarotta, M.C. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Área de Estadística. Buenos Aires, Argentina
Fil: Neild, D.M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Área de Teriogenología. Buenos Aires, Argentina
El colorante azul de toluidina (AT) se une al ADN permitiendo diferenciar espermatozoides de acuerdo al grado de condensación de la cromatina. Los objetivos de este trabajo fueron: poner a punto una técnica que evalúe la condensación de la cromatina espermática de llama, determinar los patrones de condensación para la especie mediante la tinción con AT y determinar si es posible utilizar ditíotreitol (DTT) como control positivo de la tinción. Se ensayaron 2 tiempos de fijación de las muestras con etanol 96 º (2 y 30 minutos) y 3 tiempos de incubación con DTT al 1% (30 seg, 1,5 min y 3 min). Los patrones de coloración observados fueron: coloración celeste (negativos, sin alteración en la condensación normal de la cromatina), violeta claro (intermedios, algún grado de descondensación), violeta oscuro (positivos, alto grado de descondensación). No se observaron diferencias significativas entre los tiempos de fijación tanto en las muestras con y sin DTT. En conclusión, se logró simplificar la técnica de AT y determinar los diferentes patrones en espermatozoides de llama. Se comprobó que la incubación con DTT se puede utilizar como control positivo de la técnica y para evaluar la susceptibilidad de cada individuo a la descondensación in vitro.