Cromatografía de afinidad con péptidos como ligandos aplicada a la purificación del anticuerpo monoclonal terapéutico Bevacizumab

• Autores: Barredo Vacchelli, Gabriela R.
• Año de publicación: 2022
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Giudicessi, Silvana L.; Camperi, Silvia A.; Curto, Lucrecia; Couto, Alicia; Oggero-Eberhardt, Marcos
• Materia: Péptidos; Cromatografía; Bevacizumab; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Bevacizumab is widely used in cancer therapies due to its antiangiogenic power resulting from its\nbinding to vascular endothelial growth factor (VEGF). Its industrial purification process is based on\naffinity chromatography with immobilized protein A. The high cost and lability of the ligand, added to\nthe drastic conditions necessary to elute and recover the mAb, motivate the development of\nalternative ligands. In addition, conventional chromatographic matrices present mass transfer\nresistance and require prior clarification of the sample. The objective of this Thesis was to design\nsystems for the purification of bevacizumab based on short peptide of lower cost and with a longer\nuseful life compared to current systems based on protein A. From the screening of a peptide library\nand studies of the interaction site between bevacizumab and VEGF, peptide ligands were designed.\nThey were immobilized on chromatographic matrices and they were able to purify the mAb under\nmoderate conditions, protecting both the integrity of the biopharmaceutical and the chromatographic\nmatrix. The selected ligand, Ac-PHQGQHIGVSK, was immobilized also on magnetic nanoparticles. Those\nparticles allowed to purify bevacizumab and could be applied to unclarified samples.
Fil: Barredo Vacchelli, Gabriela R. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Bevacizumab es ampliamente utilizado en terapias oncológicas debido a su poder antiangiogénico\nfruto de su unión al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Su proceso de purificación\nindustrial, a partir del caldo de cultivo celular, se basa en cromatografía de afinidad con proteína A\ninmovilizada. El alto costo y labilidad del ligando sumado a las drásticas condiciones necesarias para\neluir y recuperar el mAb, motivan el desarrollo de ligandos alternativos. Además, las matrices\ncromatográficas convencionales presentan resistencia al transporte de masa y requieren la\nclarificación previa de la muestra. El objetivo de esta Tesis fue diseñar sistemas para la purificación de\nbevacizumab basados en péptidos cortos de menor costo y con mayor vida útil en comparación a los\nsistemas actuales basados en proteína A. A partir del screening de una biblioteca peptídica y de\nestudios del sitio de interacción entre bevacizumab y VEGF, se diseñaron ligandos peptídicos. Estos se\ninmovilizaron en matrices cromatográficas, con las cuales se logró purificar el mAb bajo condiciones\nmoderadas, protegiendo tanto la integridad del biofármaco como de la matriz cromatográfica. El\nligando seleccionado, Ac-PHQGQHIGVSK-NH2, además se lo unió a nanopartículas magnéticas. Las\nmismas permitieron purificar bevacizumab y podrían aplicarse potencialmente a muestras crudas sin\nclarificar.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas