Apoptosis induced by a GnRH analogue in a granulosa cell line from bovine ovary (BGC-1)

• Autores: Cruzans, P.R.; Carou, M.C.; Lorenzo, M.S.; Lombardo, D.M.
• Año de publicación: 2012
• Idioma: inglés
• Tipo de recurso: artículo
• Fuente: InVet, vol. 14, nº1
• Materia: Apoptosis; BGC-1; Acetato de leuprolide; GnRH; Apoptosis; BGC-1; Leuprolide acetate; GnRH
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Gonadotrophin releasing hormone receptors (GnRHR) have been identified in ovarian granulosa cells (GC) and luteal cells (CL). It has also been observed that the activation of GnRHR in GC regulates gonadal function. Studies using GnRH agonists (GnRHa) in rat ovaries, in vivo and in vitro, showed an increase in follicular atresia. Our objective was to study the regulation of apoptosis inan established line of bovine granulosa cells (BGC-1) usin gleuprolide acetate (LA) as GnRHa and ANTIDE as competitive antagonist. \nOur results demonstrate a significant increase in the proportion of apoptotic cells induced for 24 and 48 hs with 100 nM LA by morphological techniques (DAPI staining and Hematoxilin), membrane markers expression (Annexin V-FITC and PI detected by flow cytometry) and biochemical techniques such as determining caspase 3 activity. Apoptosis was partially inhibited by ANTIDE, showing per se activity when caspasa 3 activity was evaluated.\nThe analysis of the intracellular pathways regulating the apoptotic process revealed the existence of a mechanism that involves the activation of the intrinsic pathway, throughthe analysis of protein expression of Bcl-2 family (Bax and Bcl-2) andtheinhibition of the extrinsic pathway by inhibiting the activity of the enzyme phospholipase D (PLD). It is proposed that ANTIDE works as antagonist of the intrinsic pathway but as extrinsic pathway agonist as inhibiting the activity of PLD.
Fil: Cruzans, P.R. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Cruzans, P.R. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Buenos Aires, Argentina
Fil: Lorenzo, M.S. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Lorenzo, M.S. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Buenos Aires, Argentina
Fil: Carou, M.C. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Carou, M.C. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Buenos Aires, Argentina
Fil: Lombardo, D.M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriología. Buenos Aires, Argentina
Fil: Lombardo, D.M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA). Buenos Aires, Argentina
Se han identificado receptores de la hormona liberadora de gonadotrofina (GnRHR) en células de granulosa ovárica (CG) y en células luteales (CL). Asimismo, se ha observado que la activación de los GnRHR en CG regula la función gonadal. Estudios realizados utilizando agonistas de GnRH (GnRHa) en ovarios de ratas, in vivo e in vitro, demostraron un incremento de la atresia folicular. Nuestro objetivo fue estudiar la regulación de la apoptosis en una línea establecida de células de granulosa de ovario bovino (BGC-1) utilizando el acetato de leuprolide (LA) como GnRHa y el ANTIDE como antagonista competitivo.\nNuestros resultados demuestran un aumento significativo de la proporción de células apoptóticas inducidas durante 24 y 48 h con 100 nM LA, confirmado mediante técnicas morfológicas (tinción con DAPI y Hematoxilina), técnicas de expresión de marcadores en membrana (Anexina V-FITC y PI detectada por citometría de flujo) y técnicas bioquímicas como la determinación de la actividad de caspasa 3. La apoptosis fue parcialmente inhibida por el ANTIDE, registrándose una actividad per se del mismo cuando se evaluó actividad de caspasa 3.\nEl análisis de las vías intracelulares de regulación del proceso apoptótico reveló la existencia de un mecanismo que involucra la activación por la vía intrínseca, a través del análisis de la expresión de proteínas de la familia Bcl-2 (Bax y Bcl-2) y la inhibición de la vía extrínseca, a través de la inhibición de la actividad de la enzima fosfolipasa D (PLD). Proponemos que el ANTIDE actúa como antagonista de la vía intrínseca pero como agonista de la vía extrínseca inhibiendo la actividad de PLD.