Estudio de la deleción de tres genes inmunomoduladores del genoma de MVA : efecto sobre su inmunogenicidad

• Autores: Holgado, María Pía
• Año de publicación: 2017
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Gherardi, María Magdalena
• Materia: MVA; RESPUESTA CELULAR T; VACUNAS; MVA; T CELL RESPONSE; VACCINE
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El virus Vaccinia Ankara modificado (MVA, del inglés Modified Vaccinia Ankara) es un vector viralatenuado que aún conserva numerosos genes inmunomoduladores en su genoma. Nuestro gruporeportó anteriormente la optimización de este vector luego de eliminar el gen viral C12L, el cualcodifica para la proteína de unión a IL-18. En este trabajo se analizó la inmunogenicidad del vector MVA al cual se le delecionaron de manera simultánea los genes A44L, relacionado con la síntesis deesteroides, y A46R, un inhibidor de la señalización mediada por receptores Toll (MVAΔA44L-A46R); otambién incluyendo la deleción del gen C12L, previamente descripto (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R). Paraello, se evaluó la respuesta celular T contra epítopes de Vaccinia tanto en bazo como en gangliosinguinales, drenantes al sitio de inoculación, en ratones de la cepa C57BL/6. Se observó que lamagnitud de la respuesta adaptativa, tanto en la etapa aguda como de memoria, fue mayor en losanimales inmunizados con los vectores delecionados en relación a aquellos que recibieron el vectorde la cepa salvaje (MVAwt). Asimismo, el vector MVAΔC12L/ΔA44L-A46R indujo una respuestacelular T específica de memoria de mayor calidad, caracterizada tanto por la bifuncionalidad de lascélulas T-CD8+ (expresión simultánea de CD107a/b e IFN-γ) como por la capacidad de proliferaciónespecífica de las células T-CD4+ y CD8+. Al estudiar la respuesta innata generada por el MVAΔC12L/ΔA44L-A46R, se observó que este vector indujo una mayor producción de citoquinasrelacionadas con la generación de una respuesta celular T, tales como IL-12 e IFN-γ, así comomediadores pro inflamatorios y antivirales como IL-1β e IFN-β. En conclusión, este estudio describepor primera vez que la deleción simultánea de los genes inmunomoduladores del genoma de MVA,cuyas funciones se encuentran inter-relacionadas, tales como A44L, A46R y C12L constituye unametodología adecuada para incrementar la inmunogenicidad del vector generando de esta manerauna mayor respuesta inmune tanto innata como adaptativa. Esto convierte al vector MVA en unaherramienta útil y versátil para ser utilizada en el campo del desarrollo de vacunas.
Modified Vaccinia Ankara virus (MVA) is an attenuated vector that still retains manyimmunomodulatory genes in its genome. Our group previously reported the optimization of this viralvector after removing the C12L gene, coding for the IL-18 binding protein. In this work, we analyzedthe immunogenicity of MVA vectors harboring the simultaneous deletion of A44L gene, related tosteroid synthesis, and A46R, a TLR-signaling inhibitor (MVAΔA44L-A46R); or also including a deletionof C12L (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R), previously described. For this, T-cell responses against Vacciniavirus epitopes were evaluated in C57BL/6 mice in spleen and inguinal lymph-nodes, draining to thesite of inoculation. The results showed that the magnitude of the adaptive response, in both theacute and memory phases, was higher in mice immunized with the deleted vectors in relation tothose that received the MVAwt. Furthermore, MVAΔC12L/ΔA44L-A46R induced specific memory Tcell responses of higher quality, characterized by the CD8 T-cell bifunctionality (simultaneousexpression of CD107a/b and IFN-γ) and the specific proliferation capacity of CD4+ and CD8+ T-cells. The study of innate immune responses generated by the MVAΔC12L/ΔA44L-A46R indicated that thisvector induced an increased production of cytokines associated with the generation of a specific Tcellresponse, such as IL-12 and IFN-γ and also, pro inflammatory and antiviral mediators like IL-1βand IFN-β. In summary, this study describes for the first time that the simultaneous deletion ofimmunomodulatory genes from MVA genome, whose functions are inter-related, such as A44L, A46Rand C12L is an appropriate methodology to enhance the immunogenicity of the vector, enhancingboth innate and adaptive immune responses. This type of strategies converts MVA vector in a usefuland versatile tool to be used in the vaccine development field.
Fil: Holgado, María Pía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.