Efectos del receptor de progesterona sobre la elongación transcripcional del gen bcl-x humano

• Autores: Bertucci, Paola Yanina
• Año de publicación: 2012
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Pecci, Adalí; Vicent, Guillermo Pablo
• Materia: ARN POLIMERASA II; RECEPTOR DE PROGESTERONA; BCL-X; ELONGACION; CBP; GCN5; P-TEFB; NUCLEOSOMA; RNA POLIMERASE II; PROGESTERONE RECEPTOR; BCL-X; ELONGATION; CBP; GCN5; P-TEFB; NUCLEOSOME
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Los Receptores de Esteroides (SRs) regulan la expresión génica mediante su interacción con Elementosde Respueta a Hormona (HREs) ubicados en las regiones promotoras de sus genes blanco. Según elmodelo clásico de activación transcripcional, los SRs reclutan complejos que relajan el estado de lacromatina favoreciendo, así, los pasos tempranos de la transcripción. Sin embargo, a partir del uso de latécnica de inmunoprecipitacion de cromatina seguida de secuenciación masiva (ChIP-seq), se encontróque una gran parte de los sitios de unión de los SRs al ADN se encuentra ubicada en regionesintragénicas. Adicionalmente, algunos de los complejos modificadores de la cromatina asociados a losefectos de los SRs en las regiones promotoras de sus genes blanco, también fueron encontraronfavoreciendo la elongación transcripcional a lo largo de las regiones transcribibles. El objetivo de estatesis es estudiar el posible efecto de los SRs unidos a las regiones intragénicas sobre la elongación de la Pol II en genes endógenos. Para ésto se utilizaron células humanas T47D tratadas con el progestágenosintético R5020 y al gen bcl-x como modelo de estudio. Los resultados mostraron que el Receptor de Progesterona (PR) se recluta únicamente a sitios intragénicos, conjuntamente con las histonasacetiltransferasas CBP y GCN5 y el factor positivo de elongación P-TEFb. El reclutamiento de estosfactores correlaciona con un aumento en la acetilación de las histonas, el desplazamiento parcial de losnucleosomas, un aumento en la abundancia de la Pol II principalmente en el extremo 3´del gen y unamayor procesividad de la Pol II a lo largo del mismo. En su conjunto los resultados presentados en estetrabajo sugieren que la modulación de elongación de la Pol II en bcl-x humano supondría un nuevomecanismo de regulación de la expresión génica mediada por el PR.
Steroid Receptors (SRs) regulate gene expression througth their interaction with the Hormone Response Elements (HREs) located in the promoter regions of their target genes. The classicalmechanism of SR transcriptional activation explains that the SRs recruit modifying complexes to theseregions, which in turn open the target chromatin thus, favoring the first steps of gene transcription. However, recently developed genome wide technologies, as ChIP-seq, revealed that a main part of SRsbinding sites are located in intragenic regions. Additionaly, some chromatin modifying complexesclassically found in the promoter regions of the SRs target genes were also found favoring theelongation process. In this sense, it was propossed that changes in the chromatin context in intragenicregions would affect Pol II elongation. The aim of this thesis is to analyze the putative effect of the SRsbound to their intragenic sites on Pol II elongation in hormone-regulated endogenous genes. To tacklethis, we used T47D human breast cancer cell line treated with the synthetic progestin R5020 and bcl-xas a gene model. The results showed that, after the progestin addition, the Progesterone Receptor (PR)is recruited together with the acetyltransferases CBP and GCN5 and with the elongation factor PTEFbto different binding sites distributed along the intragenic region of bcl-x gene. The recruitmentof these factors correlates with an increase of histone acetylation levels, the pantial decrease innucleosome occupancy and the improvement of Pol II processivity along this gene. All together, theseresults suggest a new mechanism which involves the PR control of endogenous Pol II elongation.
Fil: Bertucci, Paola Yanina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.