Efectos del tamaño folicular y el estadio de maduración sobre la expresión de ARNm y distribución proteica en ovocitos bovinos madurados in vitro

• Autores: Racedo, Silvia Elisa
• Año de publicación: 2007
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Salamone, Daniel; Rawe, Vanesa
• Materia: TAMAÑO FOLICULAR; MADURACION OVOCITARIA BOVINA; CAPACIDAD DE DESARROLLO; ABUNDANCIA RELATIVA DE ARNM; MOTORES MOLECULARES; PROTEASOMAS; MODIFICACIONES EPIGENETICAS; FOLLICLE SIZE; BOVINE OOCYTE MATURATION; DEVELOPMENTAL COMPETENCE; MRNA RELATIVE ABUNDANCE; MOLECULAR MOTORS; PROTEASOMES; EPIGENETIC MODIFICATIONS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La capacidad de desarrollo ovocitaria es adquirida durante el desarrollo folicular y finalmente durante la maduración ovocitaria. El objetivo de esta tesis es investigar la dinámica de algunos eventos moleculares y celulares durante la maduración ovocitaria bovina comparándolos en ovocitos provenientes de folículos pequeños y grandes, los cuales presentan baja y alta capacidad de desarrollo, respectivamente.Se semi-cuantificaron, utilizando endpoint RT-PCR, las abundancias relativas de los ARNms de DYNLL1, DYNC1I1, DCTN1, PMSB1, PMSB4, PAP, Cx43, G9A, SUV39H1, DNMT1, DNMT3b y ZAR1. Por inmunofluorescencia se detectaron las distribuciones de las proteínas dynein, dynactin, 20S proteasomes (αβ subunits) e histonas modificadas (H3-K9diMe y H4-K12 acetylation). Todos los estudios fueron realizados en los estadios de GV, GVBD, MI y MII en ovocitos provenientes de folículos pequeños (< 2 mm) y folículos grandes (2 – 8 mm). Intentando establecer una asociación entre sus abundancias, distribución y la alta o baja capacidad de desarrollo. Se encontraron diferencias entre las dos poblaciones de ovocitos estudiadas en siete de los doce genes analizados, esto es, diferencias en las abundancias relativas (G9A, SUV39H1, DNMT1), en las dinámicas durante la maduración (PMSB1 y ZAR1) o en ambas (DYNLL1 y DYNC1I1). Se observaron diferencias en la localización de dynein y dynactin entre las dos poblaciones de ovocitos, mientras que la distribución de los 20S proteasomes no se vió afectada por el tamaño folicular. Las modificaciones epigenéticas H3-K9diMe y H4-K12 acetylation mostraron el mismo patrón durante la maduración en ovocitos provenientes de ambos tamaños foliculares. Las diferencias encontradas entre ovocitos recuperados de folículos pequeños y grandes muestran algunos factores ooplasmáticos relacionados a la adquisición de la capacidad de desarrollo ovocitaria durante el desarrollo folicular y la maduración.
Oocyte developmental competence is acquired during follicular development and finally during oocyte maturation. The goal of this thesis is to investigate the dynamics of some molecular and cellular events during bovine oocyte maturation comparing with oocytes recovered from small and large follicles, low and high developmental competence, respectively. The relative abundance (RA) of RNAm of DYNLL1, DYNC1I1, DCTN1, PMSB1, PMSA4, PAP, Cx43, G9A, SUV39H1, DNMT1, DNMT3b and ZAR1 were determined by semi-quantitative endpoint RT-PCR. The distribution of cytoplasmic dynein, dynactin, 20S proteasomes (αβ subunits) and two histone modifications (H3-K9diMe and H4-K12 acetylation) was assessed by immunocytochemistry. All the studies were performed at different stages of IVM, i.e. GV, GVBD, MI and MII in oocytes collected from follicles of two different size categories, that is, < 2 mm and 2–8 mm. In order to establish a relationship between their relative abundances and distributions with oocyte developmental competence. We found differences between the two populations of oocytes in seven of a total of twelve genes analyzed, in relative abundances (G9A, SUV39H1, DNMT1), in the dynamics during oocyte maturation (PMSB1 and ZAR1) or in both of them (DYNLL1 and DYNC1I1). We detected some differences in dynein and dynactin distributions between the two types of oocytes, while no differences were observed in the localization of 20S proteasomes. Each epigenetic modification H3-K9diMe or H4-K12 acetylation showed a specific pattern and they were not affected by the follicle size. The differences that we found in oocytes recovered from small and large follicles show some ooplasmic factors involved in the acquisition of oocyte developmental competence during follicular development and oocyte maturation.
Fil: Racedo, Silvia Elisa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.