Estructura genómica y diseño de nuevos vectores de transfección para Trypanosoma cruzi

• Autores: Lorenzi, Hernán Alejandro
• Año de publicación: 2001
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Levin, Mariano Jorge
• Materia: TRYPANOSOMA CRUZI; MARCADORES GENOMICOS; ORGANIZACION GENOMICA; CROMOSOMA ARTIFICIAL; FRAGMENTACION CROMOSOMICA; TRYPANOSOMA CRUZI; GENOMIC MARKERS; GENOMIC ORGANIZATION; ARTIFICIAL CHROMOSOME; CHROMOSOME FRAGMENTATION
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Trypanosoma cruzi es un parásito protozoario causante de la enfermedadde Chagas. Dentro del marco del proyecto genoma de T. cruzi y como unactivo aporte a su concreción, se ha caracterizado un nuevo tipo demarcador genético asociado a la secuencia repetida SIRE denominado SAS, que condujo a la identificación de cuatro nuevos genes y de lassecuencias repetidas TCREL y VIPER. Para contribuir a la construcción delmapa fisico, se construyó y caracterizó una biblioteca de ADN genómico de T. cruzi en vectores YAC con un tamaño promedio de inserto de 365 kpb,que fue utilizada para construir el mapa fisico de una región de ~900 kpbdel cromosoma XVI y comenzar la construcción del mapa fisico delcromosoma XX. También se construyeron cromosomas circulares enlevaduras por el método de clonado RAT utilizando las secuenciasrepetidas como base del clonado, y se probó la utilidad de un vector defragmentación que sirvió para ubicar el gen TcP2β cerca de una regióntelomérica de un cromosoma de ~1 Mpb. Para contribuir con los estudios genómicos funcionales se diseñó yconstruyó el vector necesario para obtener cromosomas artificiales de T.cruzi. Finalmente, estos estudios llevaron a utilizar comparaciones de secuenciapara definir las características de sintenía de extensas regiones genómicasde T. cruzi, Trypanosoma brucei y Leishmania major.
Trypanosoma cruzi is a parasitic protozoan that causes Chagas disease. Aspart of the T. cruzi genome project and to contribute to its concretion wehave characterized a new type of chromosomal marker associated to therepetitive element SIRE named SAS, that allowed the identification of fournovel genes and two repetitive sequences, TcREL and VIPER. Toaccomplish the construction of the physical map of the T. cruzi genome, weconstructed and characterized a genomic YAC library of T. cruzi with anaverage insert-size of 365 kbp that was used to get the physical map of a ~900 kbp region from chromosome XVI and to start the assembly ofcontigs from chromosome XX. In addition, we also constructed circularartificial chromosomes in yeast, based on a T. cruzi repetitive sequence by RAT cloning, and verified the utility of a fragmentation vector in theposition of the TcP2β gene near a telomeric region of a chromosome of ~1 Mbp. To perform functional genomic studies we designed and constructeda vector that can be used as an artificial chromosome in T. cruzi. Finally,comparison and sequence analysis allowed us the identification of largegenomic sintenic regions among T. cruzi, Trypanosoma brucei and Leishmania major.
Fil: Lorenzi, Hernán Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.