Influencia hormonal en el desarrollo del melanoma maligno humano

• Autores: Morvillo, Verónica
• Año de publicación: 1999
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Mordoh, José
• Materia: LINEA CELULAR DE MELANOMA; RECEPTOR ANDROGENICO; ANDROGENO; ANTIANDROGENO; FLUTAMIDA; RATONES ATIMICOS; MELANOMA CELL LINE; ANDROGEN RECEPTOR; ANDROGEN; ANTIANDROGEN; FLUTAMIDE; NUDE MICE
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El melanoma es una neoplasia que surge como consecuencia de la proliferacióndescontrolada de los melanocitos. El comportamiento de este tipo tumoral esimpredecible dado que puede variar desde la regresión espontánea hasta unarápida progresión y muerte del portador del tumor. El aumento de la incidenciade esta enfermedad se halla entre las más altas, y hasta el momento no se handesarrollado terapias que sean realmente efectivas. Varios estudios, han demostrado que el desarrollo del melanoma de piel es másdesfavorable en pacientes hombres que en mujeres, y que la supervivencia de lasmujeres es considerablemente mayor. Ha sido teóricamente propuesto que los andrógenos tienen un papel clave en elpeor pronóstico masculino, y que una terapia con antiandrógenos podría tenerseen consideración en pacientes hombres con melanoma. En este trabajo de Tesis se investigó, en primer lugar, la presencia de receptoresandrogénicos (RA) en el melanoma humano, se procedió luego a lacaracterización bioquímica y biológica de los mismos y por último se analizó lainfluencia de la acción antiandrogénica en el curso clinico de esta enfermedad. En los estudios realizados se utilizaron tres lineas derivadas de melanomahumano obtenidas en el laboratorio: IIB-MEL-J, IIB-MEL-LES e IIB-MEL-LAN. Los análisis de Scatchard de las tres lineas estudiadas, utilizando la unión delandrógeno sintético marcado R1881, revelaron la presencia de un solo tipo dereceptor con una constante de disociación aparente (Kd) de 11 nM a 37 °C y unacapacidad de binding de 326 fmol/mg de proteina, 58,4 fmol/10 6 células o de 35.000 sitios por célula para IIB-MEL-J, una Kd de 15 nM a 37 °C y unacapacidad de binding de 280,6 fmol/mg de proteína, 30,8 fmol/10 (6)células o de 18.500 sitios por célula en el caso de IIB-MEL-LES y Kd de 14 nM a 37 °C,capacidad de binding de 206,4 fmol/mg de proteína, 25,59 fmol/10 (6) células o de 15.400 sitios por célula en el caso de IIB-MEL-IAN. Los estudios sobre la especificidad de la unión del ligando radiactivo a estosreceptores, revelaron un comportamiento atípico de los mismos en las tres líneasanalizadas. No sólo los andrógenos testosterona (T), dihidrotestosterona (DHT), R1881 y el antiandrógeno hidroxi-flutamida (OH-Flu) compitieron con [3H]R188l,sino que estradiol (E2), progesterona (Pg) y cortisol (F), a 500 X deexceso, también fueron capaces de desplazar la unión del esteroide sintético al RA. A nivel inmunocitoquímico, no existieron evidencias de la presencia dereceptores estrogénicos o de progesterona en las tres líneas de melanoma,mientras la inmuno- reactividad para RA fue positiva en las tres líneasestudiadas. La tinción nuclear fue vigorosa, y la intensidad marcada, por encimadel 70% de las células analizadas. La presencia del RA fue analizada, además, en biopsias correspondientes ametástasis de melanomas provenientes de distintos pacientes. En todos los casosla reactividad obtenida con el anticuerpo monoclonal (AMC) ANI-IS fuepositiva y la intensidad marcada. Estudios in vitro sobre la acción de distintas hormonas y antihormonas revelaronque DHT, T, E2, o Pg estimularon la proliferación celular de IIB-MEL-J, IIB-MEL- LES e IIB-MEL-IAN mientras OH-Flu, casodex (Cas) o Tamoxifeno (Tam) la inhibieron significativamente. La acción inhibitoria del crecimiento celular ejercida por los antiandrógenostambién se manifestó in vivo cuando se utilizó flutamida (Flu) en ratonesatímicos portadores de tumores. Estos animales mostraron una disminuciónsignificativa del crecimiento tumoral y un marcado aumento de la sobrevidarespecto de animales controles o sometidos a distintas terapias. Los resultados indican la existencia de RA en melanoma humano y un claroefecto protector por parte del antiandrógeno Flu.
Cutaneous malignant melanoma is becoming increasingly important in westerncountries due to its rising incidence, especially on the white population. Asignificant difference in survival between male and female patients has beenreported, and the proportion of females cured was much greater than that ofmales. It has been theoretically proposed that an androgen dependency ofmelanoma could explain the longer survival time in women patients irrespectiveof the hormonal status of the female host. To evaluate the presence of androgen receptors in human melanoma cell lines, Scatchard analysis was performed in whole cells with [3H]-Rl881. IIB-MEL-Jcells in culture revealed a single binding component with an apparentdissociation constant (KD) at 37°C of 11 nM and a binding capacity of 326fmol/mg protein, 58,4 fmol/10(6) cells or 35.000 binding sites/cell. For IIB-MELLEScell, the KDobtained was 15 nM at 37°C, with a binding capacity of 280,6fmol/mg total cell protein, 30,8 fmol/10(6) cells, or 18.500 binding sites/cell. IIB-MEL- IAN cells showed a KD of 14 nM at 37°C with a binding capacity of 206,4fmol/mg total cell protein, 25,59 fmol/10(6) cells, or 15.400 binding sites/cell. Competition analysis revealed an atypical relaxation of specificity, since not onlyandrogen testosterone (T), dihydrotestosterone (DHT), R188] and antiandrogcnhydroxy-flutamide (OH-Flu) competed for [3H]-R1881 binding, but also estradiol (E2), progesterone (Pg), and cortiso] (F) at 500-fold excess concentration. Immunocytochemistry of human melanoma cell lines IIB-MEL-J, IIB-MEL-LESand IIB-MEL-IAN was performed with monoclonal antibody anti-AR ANI-IS. Cells lines were deeply stained,'the intensity of the staining being high in themajority of specimen. When the same cells were tested with monoclonalantibodies raised against estrogen and progesterone receptors, no staining wasfound. All of the specimens of melanoma metastases that were tested for the presence of AR were deeply stained, the intensity of the staining being high in the majority ofthe specimens. Several hormones and antihormones were tested for their ability to stimulate cellproliferation on both cell lines with similar results. DHT, T, E2 or Pg stimulatesignificantly cell proliferation, this increase being reversed by OH-Flu, casodex (Cas) or tamoxifen (Tam). In addition, male and nude mice transplanted with IIB-MEL-J tumors weretreated with flutamide (Flu) when tumors were palpable. Flu was effective indiminishing tumor growth and increasing survival rate of animals. As a conclusion, the presence of functional androgen receptors in these cells hasbeen demonstrated by growth inhibition in vitro and in vivo with antiandrogens. In this study, we demonstrate a clear stimulation of cell proliferation by anandrogen in human melanoma cell lines. The pure antiandrogen Flu showed aninhibitory effect on the cell growth in nude mice and a remarkable increase insurvival rates of nude mice. Binding studies by Scatchard plot and competitionstudies showed the presence of androgen receptor with atypical sensitivity todifferent steroids. An interesting consequence of the present results is thepossibility of clinical application of antiandrogen treatment to melanoma patientswith androgen receptor.
Fil: Morvillo, Verónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.