Búsqueda de extractos naturales con propiedades antiparasitarias y nuevos blancos moleculares para la terapia contra la enfermedad de Chagas

• Autores: Mild, Jesica Gabriela
• Año de publicación: 2016
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Edreira, Martín Miguel
• Materia: T. CRUZI; BLANCO DE DROGAS; INTERACCIONES PROTEINA-PROTEINA; ENSAYO DE BRET; DOMINIOS WW; DOMINIOS DE UNION A AMPC; T. CRUZI; DRUG TARGET; PROTEIN-PROTEIN INTERACTIONS; BRET ASSAY; WW DOMAINS; CAMP-BINDING DOMAINS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Los tratamientos disponibles contra la Enfermedad de Chagas son poco efectivos ypueden presentar efectos secundarios severos. Existe una urgente necesidad de encontrarnuevos blancos moleculares y nuevas terapias antiparasitarias. El primer objetivo de estetrabajo consistió en la búsqueda de extractos naturales con capacidad de interrumpirinteracciones entre proteínas que participan en procesos esenciales del parásito y presentancaracterísticas divergentes respecto de su contraparte en humanos. El rastreo se realizósobre la interacción entre las proteínas p14 y Sf3b155 a través de un ensayo basado en latransferencia de energía resonante bioluminiscente (BRET). Contrariamente al objetivooriginal, encontramos que un extracto de Nardophyllum bryoides provocó un aumento de laseñal de BRET, lo cual reflejaría su capacidad de modular positivamente la interacción;asimismo, el extracto presentó propiedades antiproliferativas sobre cultivos de epimastigotes. Por otra parte, se planteó la identificación de nuevos blancos moleculares a partir de dosestrategias. La primera se basó en la caracterización de potenciales interacciones entreproteínas del parásito, en particular, a través de la búsqueda de ligandos de una proteínaexclusiva de T. cruzi, TcCLB.504427.180, que presenta dominios WW y podría participar endiversos procesos fisiológicos. La segunda, se enfocó en la búsqueda de nuevos efectoresde la vía del AMPc en T. cruzi. Si bien la primera estrategia no arrojó resultados positivos, elsegundo enfoque nos permitió demostrar que la proteína TcCLB.508523.80 es capaz de unir AMPc y que podría estar involucrada en la invasión de la célula hospedadora. Estasevidencias sugieren que TcCLB.508523.80 sería un novedoso sensor primario del AMPc enla biología del parásito.
Available treatments against Chagas Disease are not completely effective and maypresent severe side effects. There is an urgent need to find new molecular targets and newantiparasitic therapies. The first objective of this work was to search for natural extracts withthe ability to interrupt interactions between proteins that are involved in essential processes ofthe parasite and posses divergent characteristics regarding its human counterparts. Thescreen was performed on the interaction between the proteins p14 and Sf3b155 through abioluminescent resonance energy transfer (BRET) assay. Contrary to the original goal, wefound that an extract of Nardophyllum bryoides caused an increase in BRET signal, whichmight reflect its ability to positively modulate the interaction; in accordance, the extractshowed antiproliferative properties on epimastigote cultures. Moreover, we intended to identify new molecular targets by using two approaches. Thefirst was based on the characterization of potential interactions between parasite proteins, inparticular, through searching ligands for TcCLB.504427.180, a T. cruzi exclusive protein,which contains WW domains and could be involved in various physiological processes. Thesecond, was focused on finding new effectors of the cAMP pathway in T. cruzi. While the firststrategy showed no positive results, the second approach allowed us to demonstrate that theprotein TcCLB.508523.80 is able to bind cAMP and could be involved in host cell invasion. These evidences suggest that TcCLB.508523.80 could be a novel primary cAMP sensor inthe parasite biology.
Fil: Mild, Jesica Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.