Análisis a gran escala de pares de interacción de Trypanosoma cruzi mediante la técnica bioluminescence resonance energy transfer

Autores
Mild, Jesica Gabriela; Gayet, Odile; Dusetti, Nelson; Vazquez, Martin Pablo; Edreira, Martin Miguel
Año de publicación
2012
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
En trabajos previos realizados en Trypanosoma cruzi, nuestro grupo ha caracterizado distintos pares interactuantes y sus interfases de interacción: SF1/U2AF65 y SF3b155/p14 del complejo trans-splicing, CPSF30/FIP1 del complejo de poliadenilación, Mago/Y14 del Exon Junction Complex e interacciones entre proteinas P de la protuberancia del ribosoma. A fin de utilizar estas interacciones como potenciales blancos terapéuticos, nuestro objetivo consistió en analizar estos pares de interacción mediante la técnica Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET). Para ello, cada una de las proteínas fue clonada en fusión con la Green Fluorescent Protein y con la Enhanced Yellow Fluorescent Protein, tanto en orientación N-terminal, como en C-terminal. Luego, todas las posibles combinaciones de cada par de interacción, fueron analizadas por BRET. En el caso de las proteínas ribosomales P, observamos en células señales positivas de interacción en al menos alguna de todas las combinaciones analizadas para cada par interactuante. Sin embargo, ninguna de las combinaciones correspondientes al par P0/P2β, resultaron positivas. Estos resultados correlacionan con los reportados anteriormente. El resto de las interacciones analizadas, también presentaron resultados positivos al testear las combinaciones en células. Más aun, al probar algunas combinaciones utilizando extractos proteicos, encontramos que las más fuertes se dan entre los pares Mago/Y14, SF3b155/p14 y CPSF30/FIP1. En este trabajo hemos validado todas las interacciones previamente descriptas por otros ensayos, mediante el uso de una técnica altamente sensible y útil para el análisis a gran escala, como lo es el BRET. Además, con esta metodología,  los pares de interacción que arrojaron altas señales tanto in vitro como en células, resultan candidatos interesantes sobre los cuales testear bibliotecas de compuestos a fin de encontrar alguno que logre interrumpir la interacción.
Fil: Mild, Jesica Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Fil: Gayet, Odile. Inserm; Francia
Fil: Dusetti, Nelson. Inserm; Francia
Fil: Vazquez, Martin Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Edreira, Martin Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
XXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias y Jornada Científica por el 50º Aniversario del Programa Nacional de Chagas e Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias
Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"
Materia
TRIPANOSOMA CRUZI
BRET
INTERACCIÓN DE PROTEINAS
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
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Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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Para ello, cada una de las proteínas fue clonada en fusión con la Green Fluorescent Protein y con la Enhanced Yellow Fluorescent Protein, tanto en orientación N-terminal, como en C-terminal. Luego, todas las posibles combinaciones de cada par de interacción, fueron analizadas por BRET. En el caso de las proteínas ribosomales P, observamos en células señales positivas de interacción en al menos alguna de todas las combinaciones analizadas para cada par interactuante. Sin embargo, ninguna de las combinaciones correspondientes al par P0/P2β, resultaron positivas. Estos resultados correlacionan con los reportados anteriormente. El resto de las interacciones analizadas, también presentaron resultados positivos al testear las combinaciones en células. Más aun, al probar algunas combinaciones utilizando extractos proteicos, encontramos que las más fuertes se dan entre los pares Mago/Y14, SF3b155/p14 y CPSF30/FIP1. En este trabajo hemos validado todas las interacciones previamente descriptas por otros ensayos, mediante el uso de una técnica altamente sensible y útil para el análisis a gran escala, como lo es el BRET. Además, con esta metodología,  los pares de interacción que arrojaron altas señales tanto in vitro como en células, resultan candidatos interesantes sobre los cuales testear bibliotecas de compuestos a fin de encontrar alguno que logre interrumpir la interacción.Fil: Mild, Jesica Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Gayet, Odile. Inserm; FranciaFil: Dusetti, Nelson. Inserm; FranciaFil: Vazquez, Martin Pablo. 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Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaXXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias y Jornada Científica por el 50º Aniversario del Programa Nacional de Chagas e Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"Ciudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades ParasitariasInstituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"Ministerio de Salud de la Nación2012info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectReuniónJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/275309Análisis a gran escala de pares de interacción de Trypanosoma cruzi mediante la técnica bioluminescence resonance energy transfer; XXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias y Jornada Científica por el 50º Aniversario del Programa Nacional de Chagas e Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2012; 38-381852-8724CONICET DigitalCONICETspainfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.rasp.msal.gov.ar/index.php/rasp/issue/archiveNacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-12-03T08:40:31Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/275309instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-12-03 08:40:32.017CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
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Fil: Mild, Jesica Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Fil: Gayet, Odile. Inserm; Francia
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Fil: Vazquez, Martin Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Edreira, Martin Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
XXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias y Jornada Científica por el 50º Aniversario del Programa Nacional de Chagas e Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"
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