Múltiples interacciones determinan la participación de ATF-2 en la regulación transcripcional del promotor del gen de la fibronectina humana

• Autores: Pesce, Carlos Gustavo
• Año de publicación: 1997
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Kornblihtt, Alberto Rodolfo
• Materia: FIBRONECTINA; TRANSCRIPCIÓN; AMP CÍCLICO; RNA ANTISENTIDO; CÉLULAS ANTISENTIDO; CÉLULAS HEPÁTICAS; ATF-2; ELEMENTO CCAAT; INTERACCIÓN RPOTEÍNA-PROTEÍNA; FIBRONECTIN; TRANSCRIPTION; CYCLIC AMP; ANTISENSE RNA; HEPATIC CELLS; ATF-2; CCAAT BOX; PROTEIN-PROTEIN INTERACTIONS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En esta tesis hemos explorado los mecanismos transcripcionales implicados en el funcionamiento del promotor de gen de la fibronectina humana (FN). En primer lugar, se analizó el impacto de mutaciones en los elementos CRE -170 y CCAAT -150 del promotor sobre la unión de factores de transcripción específicos in vitro y se confirmó la cooperación entre los sitios CRE y CCAAT. En segundo lugar, el efecto de las mutaciones sobre la actividad del promotor fue analizado en transfecciones transientes en células de hepatoma humano y en líneas celulares fibroblásticas. Estos experimentos demostraron la importancia funcional de los elementos CRE y CCAAT del promotor de FN y sugirieron la existencia de interacciones funcionales entre las proteínas que se unen a estos sitios. Se analizó también la respuesta del promotor al AMP cíclico (AMPc) y se determinó que éste actúa a través dedistintos elementos en cada tipo celular. En las células Hep3B la inducción por AMPcmediada por CRE -170 depende de CCAAT-150, implicando una interacción funcionalentre los factores unidos a ambos sitios. Utilizando un RNA antisentido descubrimos que en células hepáticas ATP-2 es esencial para la activación de la transcripción basal por CRE -l70 y, lo más importante, que la unión de ATP-2 al CRE depende de la integridad de CCAAT -150. Por otro lado, demostramos quela activación de la transcripción por ATP-2 requiere la presencia del núcleo promotor de FN y que la expresión de proteínas activadoras de ATP-2 inhibe la expresión del gen de FN. Ala luz de estos resultados proponemos un modelo en el que un heterodímero entre un factor ATF inducible por AMPc y ATF-2 activa al promotor de FN dentro de un factor compuesto ATP-CCAAT que le confiere a ATP-2 capacidades diferentes a las que posee el factor aislado.
In this thesis, we have explored the transcriptional mechanisms underlying de activity of the human fibronectin (FN) gene promoter. First, we have analyzed the effects of mutating the -170 CRE and -150 CCAAT elements on the binding of specific transcription factors in vitro, confirming the cooperation between the CRE and CCAAT sites. Second, the effect of the mutations on the activity of the promoter was investigated in transient transfections of inhuman hepatoma cells and in fibroblastic cell lines. These experiments demonstrated the functional significance of the CRE and CCAAT elements of the FN promoter and suggested the existence of functional interactions between the proteins that bind these sites. The response of the promoter to cyclic AMP (CAMP) was also analyzed, and it was shown that this molecule acts through different elements in each cell type. In Hep3B cells CAMPinduction going through the -170 CRE depends on -150 CCAAT, implying a functionalinteraction between the factor bound to both sites. Employing an antisense RNA we found that in hepatic cells ATP-2 is essential for -170 CRE to activate basal transcription and, most importantly, that the binding of ATP-2 to the CRE depends on the integrity of -150 CCAAT. Besides, we have demonstrated that activation of transcription by ATP-2 requires the presence of the FN core promoter and that the expression of ATP-2 activating proteins inhibits FN gene expression. On the light of these results, we advance a model that depicts a heterodimer between a CAMP responsive ATF factor and ATP-2 that activates the FN promoter as part of an ATF-CCAAT composite factor that confers on ATP-2 different abilities compared to the isolated factor.
Fil: Pesce, Carlos Gustavo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.