Citotoxicidad y genotoxicidad de dos extractos naturales

• Autores: García Franco, Susana Nora
• Año de publicación: 2003
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Wood, Edgardo J.; Kesten, Eva Marta
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Es de actual importancia el desarrollo y uso de extractos vegetales en elcontrol biorracional de plagas e insectos. Existe además una creciente inclinación por el uso de extractosnaturales como parte de la dieta o en aplicaciones benéficas como ungüentos olociones. Por otra parte, hay un intenso avance en la búsqueda e implementaciónde técnicas alternativas al uso de animales en la evaluación de la toxicidad de drogas y compuestos químicos. Estas razones motivaron el interés por llevar a cabo estudios decitotoxicidad y genotoxicidad, sobre extractos acuosos y metanólicos de dosvegetales autóctonos regionales de Argentina y parte de la zona subtropical de América: Vallesia glabra o Ancoche e Ilex paraguaiensis o Yerba Mate. Se efectuaron por lo tanto estos estudios, aplicando técnicas in vitrobasadas en cultivos celulares, sometidos a tres tipos de exposiciones: I) aguda, ll) repetida, lll) crónica. La Citotoxicidad se evaluó mediante a) ensayos de coloración (Cristal Violeta, Rojo Neutro) o por medición deactividades enzimáticas (Láctico deshidrogenasa, Succinatodeshidrogenasa) o por determinación de la Concentración de Proteínas. b) Eficiencia de Clonado. La Genotoxicidad se determinó por medición del Indice de Daño del ADN en el Ensayo del Cometa. Mediante exposiciones agudas se concluyó que los extractosmetanólicos de Ancoche presentaron mayor comportamiento citotóxico quelos acuosos para los ensayos que indican viabilidad celular (RN, CV, Proteínas, MTT) y menores para los que indican daño celular (LDH). Mediante el ensayo de Eficiencia de Clonado el extracto acuoso de Ilexparaguaiensis mostró ser más tóxico que el metanólico. El extracto acuoso de Ancoche a bajas concentraciones brindó ciertogrado de protección de los cultivos. Las exposiciones repetidas evidenciaron aumento de las respuestas enel pasaje sexto. Las exposiciones crónicas de los cultivos con los extractos durantenueve pasajes consecutivos permitieron observar un aumento de la repuestacitotóxica a partir del cuarto (extracto metanólico) o del quinto (extracto acuoso)tratamiento para Ancoche. En exposiciones crónicas de los cultivos con los extractos durantenueve pasajes consecutivos permitieron determinar un aumento de la repuestacitotóxica a partir del cuarto (extracto acuoso) o del quinto (extracto metanólico)tratamiento para Yerba Mate. Las Cl50 que se determinaron por estos ensayos fueron: Ancoche en extracto acuoso : 500 μg / ml - Ancoche en extracto metanólico : 250 μg / ml - Yerba Mate en extracto acuoso : 1500 μg / ml - Yerba Mate en extracto metanólico : 2000 μg / ml. Sería interesante profundizar estas evaluaciones con estudios in vitrocomplementarios que permitan caracterizar mejor estos productos y asociar, sifuera posible, actividad biológica con estructura química.
The development and use of plant extracts is presently of key importancein the biorational control of plagues and insects. Besides, natural extracts have become increasingly important as dietarycomponents or as beneficial applications, such as ointments or lotions. At the same time, there is an intense advance in the search andimplementation of alternative techniques to the animal use in the evaluation ofdrugs and chemical compounds toxicity. These reasons motivated the interest to carry out studies of cytotoxicicityand genotoxicity on aqueous and methanolic extracts of two regional nativeplants of Argentina and part of the subtropical area of America: Vallesia glabraor Ancoche and Ilex paraguaiensis or Yerba Mate. These studies were conducted using in vitro techniques based on cellcultures, which underwent three kinds of expositions: I) acute, II) repeated, lll) chronic, Cytotoxicity was evaluated by means of colorimetric staining assays withdyes (Crystal Violet, Neutral Red) or through the measurement of enzymaticactivities (Lactic dehydrogenase, Succinate dehydrogenase) or by Protein. Concentration assays. Cloning Efficiency assays for each extracts of bothplants were also run. Genotoxicity was determined by measurement of the Index of DNA Damage in the Comet assay. From the acute expositions it could be concluded that methanolicextracts of Ancoche displayed greater cytotoxic behavior than aqueous ones byall the tests run. Low concentrations of aqueos extract of Ancoche exhibitedcertain levels of protection of the cultures. For Ilex paraguaiensis, aqueous extracts resulted as more toxic thanmethanolic, mostly by means of microscopy observations and Cloning Efficiency. Repeated expositions demonstrated an increase of the response on thesixth passage. Chronic exposure of the cultures with the extracts during nineconsecutive passages allowed us to observe an increase of the cytotoxicity onthe fourth exposure (methanolic extract) or on the fifth (aqueous extract)treatment for Ancoche. Chronic exposure of the cultures with both extracts of Ilex paraguaiensisduring nine consecutive treatment showed an increase of the cytotoxicityon thefourth exposure (aqueous extract) or on the fifth(methanolic extract). Cl50 determined through this assays are: Ancoche ; aqueous extract : 500 μg / ml - Ancoche; methanolic extract: 250 μg / ml - Yerba Mate; aqueous extract : 1500 μg / ml - Yerba Mate; methanolic extract : 2000 μg / ml - Chemical composition of the extracts still have to be determined. To better characterize these products and, if possible, to associatebiological activity with chemical structure, further complementary in vitro studieshave to be carried out.
Fil: García Franco, Susana Nora. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.