Consecuencias reproductivas de la deficiencia de zinc en bovinos: análisis de los factores metabólicos involucrados y sus posibles mecanismos de acción

• Autores: Pascua, Ana Malen
• Año de publicación: 2020
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Furnus, Cecilia Cristina; Anchordoquy, Juan Mateo; Salvetti, Natalia R.; Bo, Gabriel; Lirón, Juan Pedro
• Materia: Ciencias Veterinarias; COC bovino; Oviducto bovino; Zinc; Hormonas reproductivas; Maduración in vitro; Cultivo in vitro
• Institución: Universidad Nacional de La Plata

El zinc (Zn+2) cumple funciones en innumerables procesos celulares. Sin embargo, el conocimiento acerca de su homeostasis en la célula (en particular, en el sistema reproductor bovino) es aún limitado. En este contexto, se estudió la influencia de las hormonas folículo estimulante, luteinizante, estradiol y progesterona (según correspondiera) sobre la expresión de los transportadores de Zn+2 y la concentración intracelular del mineral en i) el complejo ovocito-cúmulus (COC) bovino y ii) las células epiteliales del oviducto bovino (CEOB). Luego, se evaluó la expresión de dichos transportadores según la fase del ciclo estral en los COC y las CEOB, y, además, el efecto del Zn+2 y el estradiol sobre el proteoma de las CEOB. Para ello, se realizaron maduraciones in vitro de COC y cultivos in vitro de CEOB obtenidos a partir de hembras de frigorífico. La concentración intracelular de Zn+2 se determinó por medio del colorante FluoZin-3, la expresión y cuantificación de los transportadores por PCR en Tiempo Real (PCR-RT), y el análisis proteómico por espectrometría de masas (nano LC- MS/MS) y análisis funcionales. Las investigaciones permitieron comprobar la expresión génica de transportadores de Zn+2 en los COC y las CEOB, y señalaron que las hormonas estudiadas participarían activamente en la regulación intracelular del Zn+2 en dichas células. Además, se detectó interacción entre las hormonas y el Zn+2 en la mayoría de los casos al evaluar el nivel intracelular de Zn+2 y la expresión génica de sus transportadores. En el COC y las CEOB, los transportadores cuantificados tuvieron diferencias en su expresión de ARNm entre las fases luteal y folicular del ciclo estral. 2 La exposición de las CEOB al Zn+2 en presencia de E2 provocó cambios en la abundancia de proteínas involucradas en involucradas en la remodelación del epitelio oviductal y la proteostasis, entre otros procesos.
Zinc (Zn2+ ) is involved in a myriad of cellular functions. However, knowledge about Zn2+ homeostasis in the cell (particularly, in the bovine reproductive system) is still scarce. In this context, follicle-stimulating and luteinizing hormones, as well as estradiol and progesterone (where appropriate) were analyzed on how they may influence Zn2+ transporters gene expression and intracellular Zn2+ levels in i) the oocyte-cumulus complex (OCC) and ii) the bovine oviductal epithelial cells (BOEC). Subsequently, Zn2+ transporters gene expression in different estral cycle phases (luteal or follicular) was assessed in both OCC and BOEC. Furthermore, a proteomic study on how estradiol and Zn2+ impact the BOEC proteome was performed. For these purposes, in vitro maturation of OCC and in vitro culture of BOEC were employed. Zn2+ intracellular concentration was determined using indicator FluoZin-3, gene expresion analyses and cuantification by Real Time PCR (RT-PCR) and the proteomic studies by mass spectrometry (nano LC- MS/MS) and functional analyses. Experiments confirmed the transporters gene expression in OCC and BOEC, and showed that these hormones would actively participate in intracellular Zn2+ regulation. Moreover, Zn2+ -hormone interplay was detected in most FluoZin-3 and RT-PCR results. Transporters whose gene expression was quantified held differences in their mARN levels when comparing the luteal and follicular phases of the estral cycle. Lastly, BOEC exposure to estradiol and Zn2+ during culture led to changes in the abundance of proteins involved in the oviduct epithelia remodeling and proteostasis, among other cell proceses.
Doctora en Ciencias Veterinarias
Facultad de Ciencias Veterinarias
Facultad de Ciencias Veterinarias