Evaluación de la tolerancia al estrés salino mediante la transformación genética de lotus tenuis con el gen que codifica para un transportador Na+/H+

• Autores: Álvarez, Mayra Yanet
• Año de publicación: 2019
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de grado
• Colaborador/a o director/a de tesis: Espasandin, Fabiana Daniela
• Materia: Estrés salino; Transformación genética; Lotus tenuis; Transportador Na+/H+
• Institución: Universidad Nacional del Nordeste

Fil: Álvarez, Mayra Yanet. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ingeniería; Argentina.
Fil: Espasandin, Fabiana Daniela. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina.
El estrés salino es uno de los principales estreses abióticos que afectan seriamente el crecimiento y rendimiento de los cultivos. Una de las estrategias de las plantas para mitigar los daños producidos por tal estrés es evitar la toxicidad iónica mediante la compartimentalización del Na+ en vacuolas, acumulando dicho ion en las mismas y favoreciendo una adecuada relación Na+/K+ en el citosol de las células. Dicho mecanismo se logra a través de anti-transportadores Na+/H+ del tipo NHX localizados en el tonoplasto (clase I) o en las membranas endosomales (clase II). Con el propósito de determinar la localización subcelular del anti-transportador de iones NHX1 de Lotus tenuis, se procedió a la modificación genética de plantas de la especie en estudio con el gen que codifica para la enzima NHX1 de L. tenuis y el gen que codifica para la proteína verde fluorescente (GFP), mediante el protocolo de transformación indirecto con cepas de Agrobacterium tumefaciens conteniendo el vector binario pCaMV35S:NHX1:GFP y el gen bar como marcador selectivo. La metodología consisitió en inocular los segmentos foliares con la suspensión de A. tumefaciens. Seguidamente, los explantes transformados fueron seleccionados con glufosinato de amonio e incubados en condiciones de luz y temperatura controladas. Las plantas resistentes a glufosinato fueron analizadas mediante amplificación (PCR), utilizando oligonucleótidos específicos para el gen gfp. Como resultado se obtuvieron 5 líneas transgénicas de 28 plantas analizadas. Posteriormente, las hojas de las plantas transformadas genéticamente fueron plasmolizadas y observadas en un microscopio confocal, permitiendo localizar a la proteína en la membrana vacuolar, hebras transvacuolares y estructuras esféricas denominadas bulbs, sugiriendo que el anti- transportador NHX1 de L. tenuis pertenece a la clase I de la familia de los NHX, favoreciendo la compartimentalización de Na+ dentro de la vacuola, aliviando la toxicidad iónica.