Acción in vitro de moléculas orgánicas como inhibidores de las metaloproteinasas del veneno de Bothrops diporus

• Autores: Schwesig, Ingrid Denise
• Año de publicación: 2025
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de grado
• Colaborador/a o director/a de tesis: Gay, Claudia Carolina; Echeverría, Silvina Margarita
• Materia: Bothrops diporus; Venenos de serpientes; Metaloproteinasas; Inhibidores enzimáticos; Accidentes ofídicos; Ciencias biológicas
• Institución: Universidad Nacional del Nordeste

Fil: Schwesig, Ingrid Denise. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina.
Fil: Gay, Claudia Carolina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina.
Fil: Echeverría, Silvina Margarita. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina.
Las serpientes del género Bothrops, son las responsables del mayor número de accidentes ofídicos en Argentina, cuyo envenenamiento se caracteriza por efectos proteolíticos, coagulantes y hemorrágicos. Bothrops diporus, Cope, 1862 (“yarará chica”) corresponde a una de las principales especies de importancia sanitaria en la región. El proteoma de este veneno comprende toxinas pertenecientes a catorce familias, siendo las más abundantes las metaloproteinasas de venenos de serpientes (SVMPs). El tratamiento de los accidentes ofídicos consiste en la administración del antiveneno específico. En los últimos años se ha propuesto la terapia combinatoria, anticuerpos e inhibidores (moléculas orgánicas pequeñas). En este trabajo se evaluó el potencial de tres moléculas orgánicas (MOs) [ácido ascórbico (AA), rojo de alizarina S (Az) y quercetina (Q)] para inhibir la actividad proteolítica in vitro del veneno de B. diporus. Se prepararon mezclas de veneno: MOs y se ensayaron dos métodos cualitativos, electroforesis en geles de poliacrilamida y zimografía y, dos cuantitativos, placas de agar-leche y actividad azocaseinolítica, para evaluar la inhibición por método de pre-incubación. Se realizó, el ensayo de actividad hemolítica indirecta para medir si estas moléculas eran capaces de inhibir las fosfolipasas A2 (PLA2s), segunda familia más abundante de este veneno. Se realizó un análisis densitométrico (ImageJ) y estadístico mediante ANOVA (Infostat). El análisis electroforético evidenció que las tres moléculas mostraron un efecto protector parcial frente a la degradación proteolítica de la caseína. Se pudo observar que tanto AA como Q duplicaron la intensidad de la banda αs1 de la caseína (αs1-CN) respecto al veneno. Sin embargo, la relación (masa:masa, m:m) de veneno:AA utilizada fue 10 veces más alta a la de veneno:Q. Asimismo, la relación más alta de veneno:Az (1:20), mostró que la intensidad dicha banda aumentó 26 veces respecto al control. Este resultado muestra un efecto inhibitorio mayor de Az, seguido de Q y AA. Se observaron dos bandas claras de degradación, que corresponden a zonas donde se posicionaron las SVMPs del veneno, por zimografía. Si bien se puede ver una leve disminución de las bandas en presencia de Q, no fue posible determinar una diferencia significativa por densitometría. Por otro lado, el método cuantitativo en placas de agar leche, mostró que la mayor inhibición observada fue también con Az, lo que permitió calcular la Concentración Inhibitoria 50 (CI50), dando un valor tres veces mayor (CI50= 11,1 mM) al previamente reportado para el veneno de B. alternatus con Az (CI50= 3,6 mM). El mayor valor de CI50 obtenido para B. diporus, probablemente se deba a que la Az se una mejor al sitio catalítico de las SVMPs PIII (mayoritarias en el veneno de B. alternatus) que al de la clase PI. Sin embargo, este método resultó poco sensible para evaluar AA o Q, debido a variaciones de pH o solubilidad de las mezclas. La actividad azocaseinolitica, permitió ensayar relaciones más altas de veneno:Q (1:0,75), observándose una reducción del 42% de la actividad del veneno. Sin embargo, este método no resultó adecuado para Az y AA debido a interferencias metodológicas. Finalmente, se evaluó la inhibición de la actividad hemolítica indirecta del veneno de B. diporus, sin observarse inhibición significativa con ninguna de las moléculas, bajo las condiciones ensayadas. Si bien estudios previos reportaron efectos inhibitorios de Q y AA sobre PLA₂s de otros venenos, estas discrepancias podrían deberse a variaciones interespecíficas en la composición y tipo de isoformas. En este sentido, el estudio de compuestos naturales (o sintéticos) como potenciales inhibidores de las SVMPs, abre un nuevo abanico de posibilidades para explorar alternativas para el tratamiento complementario de los accidentes ofídicos.