Caracterización de dos formulaciones vacunales como sistemas de liberación en mucosas de la quimera BLSOmp31 : evaluación de la inmunogenicidad y de la protección conferida contra...

• Autores: Díaz, Alejandra Graciela
• Año de publicación: 2016
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Estein, Silvia Marcela; Goldbaum, Fernando Alberto
• Materia: Medicina veterinaria; Brucella ovis; Ovinos; Sistemas de inmunización; Patología animal; Reproducción animal; Vacunas; BLSOmp31; Epididimitis; Grandes animales; Tesis de doctorado
• Institución: Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires

Brucella ovis (B. ovis) es el agente causal de la epididimitis contagiosa del carnero (ECC), principal causa de problemas reproductivos en establecimientos de cría ovina. Si bien la cepa atenuada Brucella melitensis Rev.1 se emplea como herramienta preventiva, presenta numerosas desventajas, por lo cual es necesario el desarrollo de vacunas subcelulares que soslayen estos inconvenientes. Además, dado que B. ovis inicia el proceso infeccioso en la superficie mucosa, una respuesta inmunitaria local protectora constituye un desafío interesante en el desarrollo de vacunas. La quimera BLSOmp31 formulada en adyuvante oleoso y administrada vía parenteral como proteína indujo niveles de anticuerpos e interferón gamma elevados y confirió protección significativa contra el desafío con B. ovis (75%). La vacunación en las mucosas genera una respuesta inmunitaria específica de tipo secretoria y de memoria en el sitio de aplicación del inmunógeno, en otras mucosas y a nivel sistémico. Para lograr una eficaz y sólida respuesta inmunitaria en las mucosas, es crítica la vía de administración de la vacuna subcelular y a su vez el empleo de sistemas de liberación o entrega del inmunógeno que sean adecuados, y/o el uso de potentes adyuvantes. En el presente proyecto de Tesis se diseñaron y caracterizaron formulaciones vacunales basadas en el empleo de la quimera BLSOmp31 para su posterior administración en las mucosas nasal y/o conjuntival del macho ovino. Se evaluó la respuesta humoral y celular (in vivo e in vitro) y la protección conferida contra la cepa virulenta de referencia B. ovis PA76250 mediante el análisis bacteriológico de órganos del tracto reproductor y del sistema fagocítico mononuclear. Se emplearon como sistemas de liberación microesferas de quitosano producidas mediante secado por “spray” y geles termosensibles de Poloxamer P407 para la administración por la vía intranasal y por la vía intranasal y conjuntival respectivamente. Los resultados obtenidos demuestran que las estrategias empleadas indujeron una respuesta humoral y celular que protegió parcialmente contra B. ovis, teniendo en cuenta la proporción de órganos infectados y el número de UFC aislado de los órganos muestreados. Cabe destacar que estos sistemas de inmunización redujeron el porcentaje de infección y el número de bacterias por órgano en un nivel similar al grupo control BLSOmp31-AFI.
Fil: Díaz, Alejandra Graciela. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Fil: Estein, Silvia Marcela. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Fil: Goldbaum, Fernando Alberto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.
Brucella ovis is the etiologic agent of ovine brucellosis, which causes significant reproductive disorders in flocks worldwide. Immunization with B. melitensis Rev 1 gives protection against B. ovis but it has important disadvantages. Consequently, there is a need for new brucellosis vaccines to be developed for overcoming these drawbacks. In addition, B. ovis initiates its infectious process at mucosal surfaces thus, achieving a local immune response is an interesting point to consider in the development of vaccines. The polimeryc antigen BLSOmp31 formulated with Incomplete Freund Adjuvant (IFA) parenterally administered induced high levels of specific IgG antibodies gamma interferon and was significantly protective against B. ovis experimental infection. Mucosal immunization compared to parenteral route is able to induce a secretory specific immune response in the site of immunization and in distant mucosal sites. Also, it is capable of inducing a systemic immune response and memory T cells. In order to obtain a solid and efficient immune response at mucosal surfaces is critical the immunization route and also the use of an adequate delivery system and/or potent adjuvants. In the present Thesis it was proposed to develop and characterize vaccine formulations based all of them in the use of chimeric BLSOmp31 for administration at nasal and conjunctival mucosae. These vaccine formulations were administered to lambs in order to study the humoral and cellular immune response and the conferred protection against a virulent strain of B. ovis. In addition, it may contribute to understanding the mechanisms involved in the immune response in sheep. As delivery system were used chitosan microspheres obtained by the spray dried technique and thermosensitive gel of poloxamer. Formulation based on chitosan microspheres was intranasally administered and those of poloxamer gel were administered at nasal and conjunctival mucosa. The results of this Thesis show that the strategy of immunization used in the study were able to induce a humoral and cellular immune response which was partially protective against experimental challenge against B. ovis, if the proportion of infected organs and the CFU/organ are considered. It is remarkable that both immunization systems reduced the percentage of infection and the number of bacteria per organ at similar levels to the control vaccine BLSOmp31 formulated with IFA.