Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica

Autores
Burgardt, Noelia I.
Año de publicación
2010
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
tesis doctoral
Estado
versión aceptada
Colaborador/a o director/a de tesis
Ceolín, Marcelo
Parisi, Gustavo
Garda, Horacio
Fernández, Claudio
Descripción
Fil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Expresión y Plegado de Proteínas; Argentina.
Fil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de La Plata. Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas. Laboratorio de Biofisicoquímica; Argentina.
Los lípidos cumplen roles importantes en diversas funciones biológicas a pesar de presentar una muy baja solubilidad en agua, el solvente principal de la vida. Los mecanismos celulares desarrollados para el manejo de los lípidos permiten la utilización de los mismos y mantienen la correcta homeostasis celular. En mamíferos, cualquier alteración en alguno de estos mecanismos puede producir patologías como diabetes, aterosclerosis y mal de Alzheimer, entre otras. Estudiar cómo las células manejan los lípidos es un paso importante en la comprensión de toda la fisiología y bioquímica celular. El transporte intracelular mediado por las SLBP parece ser un mecanismo importante para la disolución y movilización intracelular de lípidos. Sin embargo, actualmente no está claro si las SLBP son indispensables para el correcto funcionamiento celular. Las distintas SLBP difieren en su estructura, filogenia, localización tisular e intracelular y espectro de unión de ligandos, presentando un panorama complejo para la interpretación de las funciones de estas proteínas. Sin embargo, entre las SLBP podemos encontrar una familia con propiedades que abarcan las de todos los integrantes: las proteínas transportadoras de esteroles (SCP2). Las SCP2 unen un amplio grupo de lípidos incluyendo los ligandos de todas las SLBP y son las únicas presentes en todos los reinos biológicos. Esta familia de proteínas ha sido estudiada mayormente en mamíferos, organismos donde se expresan otras SLBP y otras enzimas multidominios que poseen uno o más dominios SCP2. Un sistema alternativo para el estudio del metabolismo de lípidos es la levadura Yarrowia lipolytica, la cual posee una alta capacidad de consumo de compuestos hidrofóbicos. Nuestro laboratorio identificó y aisló la proteína transportadora de esteroles de Yarrowia lipolytica (YLSCP2), la cual es la única SLBP presente en el microorganismo. Estas características hacen de YLSCP2 un excelente modelo para el estudio de la familia de proteínas transportadoras de esteroles. El objetivo general de este trabajo de tesis es completar una caracterización estructural, termodinámica y funcional de YLSCP2, buscando esclarecer el mecanismo funcional de las SCP2. Los objetivos específicos son la caracterización biofísica, la determinación de la unión de diversos ligandos hidrofóbicos y el estudio del efecto de la unión de dichos ligandos sobre la estructura y la estabilidad de la proteína. Para alcanzar estos objetivos fueron diseñados un sistema de expresión recombinante de YLSCP2 en E. coli y un protocolo para obtener YLSCP2 en grandes cantidades y alta pureza. A partir de los resultados de los espectros de absorción UV, de dicroísmo circular, fluorescencia, FPLC y SAXS pudo determinarse que la proteína se encuentra correctamente plegada. La estabilidad de YLSCP2 en función del pH demuestra que esta proteína es más estable a pH básico que a pH ácido. En el desplegado de YLSCP2 inducido por el agregado de urea se observaron al menos tres transiciones. YLSCP2 puede unir con alta afinidad ácido cis-parinárico (AP), ácido palmítico (PAL), palmitoil-Coenzima A (pCoA), 1,2-dipalmitoil-sn-glicerol (DPG), fosfatidil colina de huevo (EPC), dehidroergosterol (DHE), ácido 1-anilinonaftalen-8-sulfónico (ANS) y merocianina-540 (MC). La unión de los ligandos fue determinada mediante diferentes técnicas, dependiendo de las propiedades de cada ligando. Además fue demostrado que YLSCP2 interacciona con vesículas lipídicas.
Materia
Proteínas
Esteroles
Lípidos
Proteínas transportadoras de ácidos grasos
Yarrowia
Proteins
Sterols
Lipids
Fatty acid transport proteins
Esteróis
Lipídeos
Proteínas de transporte de ácido graxo
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Repositorio
RIDAA (UNQ)
Institución
Universidad Nacional de Quilmes
OAI Identificador
oai:ridaa.unq.edu.ar:20.500.11807/184

id RIDAA_4dce7581175d9de1e26603a9c6c43c7a
oai_identifier_str oai:ridaa.unq.edu.ar:20.500.11807/184
network_acronym_str RIDAA
repository_id_str 4108
network_name_str RIDAA (UNQ)
spelling Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolyticaBurgardt, Noelia I.ProteínasEsterolesLípidosProteínas transportadoras de ácidos grasosYarrowiaProteinsSterolsLipidsFatty acid transport proteinsEsteróisLipídeosProteínas de transporte de ácido graxoFil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Expresión y Plegado de Proteínas; Argentina.Fil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de La Plata. Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas. Laboratorio de Biofisicoquímica; Argentina.Los lípidos cumplen roles importantes en diversas funciones biológicas a pesar de presentar una muy baja solubilidad en agua, el solvente principal de la vida. Los mecanismos celulares desarrollados para el manejo de los lípidos permiten la utilización de los mismos y mantienen la correcta homeostasis celular. En mamíferos, cualquier alteración en alguno de estos mecanismos puede producir patologías como diabetes, aterosclerosis y mal de Alzheimer, entre otras. Estudiar cómo las células manejan los lípidos es un paso importante en la comprensión de toda la fisiología y bioquímica celular. El transporte intracelular mediado por las SLBP parece ser un mecanismo importante para la disolución y movilización intracelular de lípidos. Sin embargo, actualmente no está claro si las SLBP son indispensables para el correcto funcionamiento celular. Las distintas SLBP difieren en su estructura, filogenia, localización tisular e intracelular y espectro de unión de ligandos, presentando un panorama complejo para la interpretación de las funciones de estas proteínas. Sin embargo, entre las SLBP podemos encontrar una familia con propiedades que abarcan las de todos los integrantes: las proteínas transportadoras de esteroles (SCP2). Las SCP2 unen un amplio grupo de lípidos incluyendo los ligandos de todas las SLBP y son las únicas presentes en todos los reinos biológicos. Esta familia de proteínas ha sido estudiada mayormente en mamíferos, organismos donde se expresan otras SLBP y otras enzimas multidominios que poseen uno o más dominios SCP2. Un sistema alternativo para el estudio del metabolismo de lípidos es la levadura Yarrowia lipolytica, la cual posee una alta capacidad de consumo de compuestos hidrofóbicos. Nuestro laboratorio identificó y aisló la proteína transportadora de esteroles de Yarrowia lipolytica (YLSCP2), la cual es la única SLBP presente en el microorganismo. Estas características hacen de YLSCP2 un excelente modelo para el estudio de la familia de proteínas transportadoras de esteroles. El objetivo general de este trabajo de tesis es completar una caracterización estructural, termodinámica y funcional de YLSCP2, buscando esclarecer el mecanismo funcional de las SCP2. Los objetivos específicos son la caracterización biofísica, la determinación de la unión de diversos ligandos hidrofóbicos y el estudio del efecto de la unión de dichos ligandos sobre la estructura y la estabilidad de la proteína. Para alcanzar estos objetivos fueron diseñados un sistema de expresión recombinante de YLSCP2 en E. coli y un protocolo para obtener YLSCP2 en grandes cantidades y alta pureza. A partir de los resultados de los espectros de absorción UV, de dicroísmo circular, fluorescencia, FPLC y SAXS pudo determinarse que la proteína se encuentra correctamente plegada. La estabilidad de YLSCP2 en función del pH demuestra que esta proteína es más estable a pH básico que a pH ácido. En el desplegado de YLSCP2 inducido por el agregado de urea se observaron al menos tres transiciones. YLSCP2 puede unir con alta afinidad ácido cis-parinárico (AP), ácido palmítico (PAL), palmitoil-Coenzima A (pCoA), 1,2-dipalmitoil-sn-glicerol (DPG), fosfatidil colina de huevo (EPC), dehidroergosterol (DHE), ácido 1-anilinonaftalen-8-sulfónico (ANS) y merocianina-540 (MC). La unión de los ligandos fue determinada mediante diferentes técnicas, dependiendo de las propiedades de cada ligando. Además fue demostrado que YLSCP2 interacciona con vesículas lipídicas.Universidad Nacional de QuilmesCeolín, MarceloParisi, GustavoGarda, HoracioFernández, Claudio2010-03-12info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06info:ar-repo/semantics/tesisDoctoralapplication/pdfhttp://ridaa.unq.edu.ar/handle/20.500.11807/184spainfo:eu-repo/grantAgreement/Conicet///AR. Ciudad Autónoma de Buenos Airesinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/reponame:RIDAA (UNQ)instname:Universidad Nacional de Quilmes2025-09-29T13:40:16Zoai:ridaa.unq.edu.ar:20.500.11807/184instacron:UNQInstitucionalhttp://ridaa.unq.edu.ar/Universidad públicaNo correspondehttp://ridaa.unq.edu.ar/oai/snrdalejandro@unq.edu.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:41082025-09-29 13:40:16.819RIDAA (UNQ) - Universidad Nacional de Quilmesfalse
dc.title.none.fl_str_mv Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
title Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
spellingShingle Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
Burgardt, Noelia I.
Proteínas
Esteroles
Lípidos
Proteínas transportadoras de ácidos grasos
Yarrowia
Proteins
Sterols
Lipids
Fatty acid transport proteins
Esteróis
Lipídeos
Proteínas de transporte de ácido graxo
title_short Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
title_full Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
title_fullStr Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
title_full_unstemmed Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
title_sort Caracterización bioquímica y biofísica de la proteína transportadora de esteroles de la levadura Yarrowia lipolytica
dc.creator.none.fl_str_mv Burgardt, Noelia I.
author Burgardt, Noelia I.
author_facet Burgardt, Noelia I.
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Ceolín, Marcelo
Parisi, Gustavo
Garda, Horacio
Fernández, Claudio
dc.subject.none.fl_str_mv Proteínas
Esteroles
Lípidos
Proteínas transportadoras de ácidos grasos
Yarrowia
Proteins
Sterols
Lipids
Fatty acid transport proteins
Esteróis
Lipídeos
Proteínas de transporte de ácido graxo
topic Proteínas
Esteroles
Lípidos
Proteínas transportadoras de ácidos grasos
Yarrowia
Proteins
Sterols
Lipids
Fatty acid transport proteins
Esteróis
Lipídeos
Proteínas de transporte de ácido graxo
dc.description.none.fl_txt_mv Fil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Expresión y Plegado de Proteínas; Argentina.
Fil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de La Plata. Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas. Laboratorio de Biofisicoquímica; Argentina.
Los lípidos cumplen roles importantes en diversas funciones biológicas a pesar de presentar una muy baja solubilidad en agua, el solvente principal de la vida. Los mecanismos celulares desarrollados para el manejo de los lípidos permiten la utilización de los mismos y mantienen la correcta homeostasis celular. En mamíferos, cualquier alteración en alguno de estos mecanismos puede producir patologías como diabetes, aterosclerosis y mal de Alzheimer, entre otras. Estudiar cómo las células manejan los lípidos es un paso importante en la comprensión de toda la fisiología y bioquímica celular. El transporte intracelular mediado por las SLBP parece ser un mecanismo importante para la disolución y movilización intracelular de lípidos. Sin embargo, actualmente no está claro si las SLBP son indispensables para el correcto funcionamiento celular. Las distintas SLBP difieren en su estructura, filogenia, localización tisular e intracelular y espectro de unión de ligandos, presentando un panorama complejo para la interpretación de las funciones de estas proteínas. Sin embargo, entre las SLBP podemos encontrar una familia con propiedades que abarcan las de todos los integrantes: las proteínas transportadoras de esteroles (SCP2). Las SCP2 unen un amplio grupo de lípidos incluyendo los ligandos de todas las SLBP y son las únicas presentes en todos los reinos biológicos. Esta familia de proteínas ha sido estudiada mayormente en mamíferos, organismos donde se expresan otras SLBP y otras enzimas multidominios que poseen uno o más dominios SCP2. Un sistema alternativo para el estudio del metabolismo de lípidos es la levadura Yarrowia lipolytica, la cual posee una alta capacidad de consumo de compuestos hidrofóbicos. Nuestro laboratorio identificó y aisló la proteína transportadora de esteroles de Yarrowia lipolytica (YLSCP2), la cual es la única SLBP presente en el microorganismo. Estas características hacen de YLSCP2 un excelente modelo para el estudio de la familia de proteínas transportadoras de esteroles. El objetivo general de este trabajo de tesis es completar una caracterización estructural, termodinámica y funcional de YLSCP2, buscando esclarecer el mecanismo funcional de las SCP2. Los objetivos específicos son la caracterización biofísica, la determinación de la unión de diversos ligandos hidrofóbicos y el estudio del efecto de la unión de dichos ligandos sobre la estructura y la estabilidad de la proteína. Para alcanzar estos objetivos fueron diseñados un sistema de expresión recombinante de YLSCP2 en E. coli y un protocolo para obtener YLSCP2 en grandes cantidades y alta pureza. A partir de los resultados de los espectros de absorción UV, de dicroísmo circular, fluorescencia, FPLC y SAXS pudo determinarse que la proteína se encuentra correctamente plegada. La estabilidad de YLSCP2 en función del pH demuestra que esta proteína es más estable a pH básico que a pH ácido. En el desplegado de YLSCP2 inducido por el agregado de urea se observaron al menos tres transiciones. YLSCP2 puede unir con alta afinidad ácido cis-parinárico (AP), ácido palmítico (PAL), palmitoil-Coenzima A (pCoA), 1,2-dipalmitoil-sn-glicerol (DPG), fosfatidil colina de huevo (EPC), dehidroergosterol (DHE), ácido 1-anilinonaftalen-8-sulfónico (ANS) y merocianina-540 (MC). La unión de los ligandos fue determinada mediante diferentes técnicas, dependiendo de las propiedades de cada ligando. Además fue demostrado que YLSCP2 interacciona con vesículas lipídicas.
description Fil: Burgardt, Noelia I. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Expresión y Plegado de Proteínas; Argentina.
publishDate 2010
dc.date.none.fl_str_mv 2010-03-12
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
http://purl.org/coar/resource_type/c_db06
info:ar-repo/semantics/tesisDoctoral
format doctoralThesis
status_str acceptedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://ridaa.unq.edu.ar/handle/20.500.11807/184
url http://ridaa.unq.edu.ar/handle/20.500.11807/184
dc.language.none.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.none.fl_str_mv info:eu-repo/grantAgreement/Conicet///AR. Ciudad Autónoma de Buenos Aires
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidad Nacional de Quilmes
publisher.none.fl_str_mv Universidad Nacional de Quilmes
dc.source.none.fl_str_mv reponame:RIDAA (UNQ)
instname:Universidad Nacional de Quilmes
reponame_str RIDAA (UNQ)
collection RIDAA (UNQ)
instname_str Universidad Nacional de Quilmes
repository.name.fl_str_mv RIDAA (UNQ) - Universidad Nacional de Quilmes
repository.mail.fl_str_mv alejandro@unq.edu.ar
_version_ 1844618631202209792
score 13.070432