Nuevos Horizontes en medicina de precisión: Estudios de biomarcadores moleculares intestinales y sistémicos asociados a microvesículas en Enfermedad Inflamatoria Intestinal

• Autores: Belforte, Fiorella Sabrina; Todone, Marcos; Penas Steinhardt, Alberto
• Año de publicación: 2024
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: informe técnico
• Materia: MEDICINA; BIOMARCADORES MOLECULARES; ENFERMEDADES INFLAMATORIAS; GASTROENTEROLOGIA
• Institución: Fundación H. A. Barceló

Fil: Belforte, Fiorella Sabrina. Instituto Universitario de Ciencias de la Salud. Fundación Barceló; Argentina.
Fil: Todone, Marcos. Instituto Universitario de Ciencias de la Salud. Fundación Barceló; Argentina.
Fil: Penas Steinhardt, Alberto. Instituto Universitario de Ciencias de la Salud. Fundación Barceló; Argentina.
Fil: Las enfermedades inflamatorias intestinales (EII) representan un trastorno crónico complejo, poligénico y de etiología desconocida. Se cree que podrían ser resultado de una respuesta desregulada del sistema inmune a la microbiota comensal. Con el fin de estudiar la comunicación inter-reino entre las células de nuestro organismo y de nuestro microbioma, nos propusimos aislar vesículas extracelulares (EVs), decodificar los mensajes que transportan e intentar encontrar en dichos mensajes biomarcadores que nos permitan establecer un seguimiento y pronóstico de la enfermedad. A tal fin, se aislaron EVs de dos matrices: Fracción Acelular de Materia Fecal (FAMF) y la Fracción Acelular de Sangre Periférica (FASP). Se probaron dos tipos de aislamientos, uno con kit comercial Total Exosome Isolation Kit (from serum) de Invitrogen y el otro con una secuencia de ultracentrifugación (UC) en colchón de sacarosa y filtrado. Se compararon las eficiencias de los distintos aislamientos por DLS, TEM y calidad/cantidad de RNA obtenido. Además se probaron distintas estrategias de extracción de RNA para aumentar el rendimiento y mejorar la calidad del mismo. La integridad del RNA se evaluó a través del equipo Fragment Analyzer, en el INTA Castelar. Comparando la calidad y cantidad de RNA obtenido de los aislamientos con kit y con UC no se observaron diferencias entre ambos métodos. El volumen de muestra inicial resultó no alterar la cantidad de RNA final obtenida. Se logró optimizar el aislamiento por UC de manera tal de llegar a obtener EVs en la FAMF de tamaños de alrededor de 400 nm, y en la FASP de 200 nm. Los mencionados resultados sientan una base experimental a partir de la cual continuar con los aislamientos individuales de las muestras de pacientes para el screening y posterior validación de biomarcadores moleculares asociados a EVs en población de pacientes con EII.