Producción de anticuerpos específícos para su utilización en el inmunodiagnóstico

• Autores: Pérez, Lucía
• Año de publicación: 2013
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de grado
• Colaborador/a o director/a de tesis: De Marzi, Mauricio César; Costa, Hernán
• Materia: Biología; Anticuerpos; Sistema inmunológico; Peptidoglicanos; Biotecnología; Microorganismos
• Institución: Universidad Nacional de Luján

Fil: Pérez, Lucía. Universidad Nacional de Luján; Argentina.
El sistema inmune utiliza varios mecanismos para evitar que un Ag. extraño o patógeno ingrese al organismo. Muchos de los mecanismos implican la participación de los Acs, proteínas que reconocen específicamente moléculas extrañas y microbios para facilitar su eliminación. Por otro lado, en la actualidad los Acs son empleados con numerosos fines biotecnológicos entre los que se pueden destacar su uso como agentes inmunoterapeúticos o como reactivos para la detección de diversos Ags y patologías. El estudio y la obtención de estas moléculas es un claro ejemplo que relaciona íntimamente el desarrollo de la biotecnología actual con la salud humana y el diagnóstico de enfermedades. Las PGRPs son moléculas que actuarían comunicando al organismo la presencia de bacterias, cumpliendo el rol de nexo entre el reconocimiento de PGN y la inducción de señales intracelulares. Actualmente existe poca información disponible acerca de la ubicación y sobre que células expresan PGRPs, por lo que se considera necesario contar con herramientas que faciliten su detección y estudio. Por otro lado, los SAgs son toxinas proteicas producidas por bacterias, que presentan sitios de unión a dos receptores del sistema inmune, las moléculas de CMH II y los TCR. Estas proteínas inducen una potente respuesta inmune como consecuencia de la activación de un importante número de LT que liberan masivamente citoquinas proinflamatorias, como IL-1, IL-12, TNF-o, y TNF-p. Estas citoquinas serían las responsables de las consecuencias más severas de la intoxicación con SAgs como el Síndrome del shock tóxico (SST), un trastorno agudo que puede resultar en la falla múltiples de órganos y la muerte. Además, los LT activados son conducidos a la anergia o apoptosis, constituyendo así un mecanismo de evasión por parte de los microorganismos que los secretan. Actualmente no existe un tratamiento específico contra estas toxinas y el aumento de la resistencia de las bacterias a antibióticos, hace prioritario contar con herramientas alternativas tanto para su detección en alimentos, como para el tratamiento de la intoxicación que producen. En éste trabajo de tesis se expresaron diferentes proteínas recombinantes como PGRP-S, PGRP-Io, y los SAgs SSA y SEG en sistemas bacterianos, se purificaron las mismas y se emplearon como inmunógenos con el propósito de producir antisueros específicos en conejos. A partir de los sueros obtenidos se purificaron los Acs policlonales específicos. Luego de evaluar la actividad biológica de los Acs purificados y conjugar los mismos con marcadores fluorescentes se los utilizó para la detección de las proteínas antes descriptas empleando IFI y Citometría de Flujo. De esta manera se desarrollaron herramientas biotecnológicas aplicables al uso tanto en un laboratorio de investigaciones básicas, aplicadas o de diagnóstico y también para un posible empleo terapéutico.