Estudio del mecanismo de ensamblado de las nucleocápsides virales en partículas infecciosas de arenavirus: disección molecular de la interacción entre la nucleoproteína NP y la pro...

• Autores: Armella Sierra, Alicia Beatriz
• Año de publicación: 2022
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: D'Antuono, Alejandra Lorena; Cavallaro, Lucía V.; López, Nora Mabel; García, Cybele; Mbayed, Viviana; Filomatori, Claudia
• Materia: Virus Junín; Nucleoproteína; Proteína Z; Interacción; Actividad ribonucleasa; Junín virus; Nucleoprotein; Z Protein Interaction; Ribonuclease activity; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

The Junin arenavirus (JUNV) genome encodes the nucleoprotein (NP), the envelope glycoproteins precursor (GPC), the L RNA polymerase, and the Z matrix protein. NP is organized into two globular domains, separated by a flexible linker. Z comprises a central RING domain flanked by the N- and C-terminal mobile arms.\nBased on the information obtained for other arenaviruses, indicating that Z-NP interaction is necessary for the incorporation of the nucleocapsids into virions, we aimed to: 1) analyze the interaction between JUNV NP and Z proteins, both in vitro and in cellulo systems 2) elucidate the Z residues involved in this interaction and 3) examine the enzymatic activity of the C-terminal domain (CTD) of NP. To this, Z, fused to Maltose Binding Protein, and the CTD domain of NP (NPctd) were expressed in bacterial expression systems and further purified. The interaction between both proteins was analyzed in vitro by agarose gel retardation and pulldown assays. Alongside, immunoprecipitation experiments were performed to evaluate Z-N interaction in mammalian cells. Results suggest that NPctd interacts with Z, and that hydrophobic residues located within the C-terminal arm of Z are involved in this interaction. Furthermore, we found that NPctd displays ribonuclease activity, not previously reported for JUNV.
Fil: Armella Sierra, Alicia Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
El genoma del arenavirus Junín ( codifica la nucleoproteína ( el precursor de\nlas glicoproteínas de envoltura, la ARN polimerasa, y la proteína matriz Z. NP está\nconstituida por dos dominios globulares (NTD y CTD) separados por un conector flexible. Z\nposee un dominio RING central flanqueado por los brazos N y C terminales móviles.\nEn base a antecedentes obtenidos para otros arenavirus, indicando que la interacción\nentre las proteínas Z y NP es necesaria para la incorpo ración de las nucleocápsides a los\nviriones, nos propusimos: 1) Caracterizar la interacción entre las proteínas NP y Z de JUNV\nin vitro y en células 2) Dilucidar los residuos de Z involucrados en la interacción. 3) Analizar\nla actividad enzimática del CTD de NP. Así, se expresaron y purificaron la proteína Z como\nfusión a Maltose Binding Protein y el dominio CTD de NP. La interacción entre ambas\npro teínas fue analizada in vitro mediante ensayos de retardo en geles de aga rosa y\ncoprecipitación, mientras que se emplearon experimentos de inmunoprecipitación para\nevaluarla en el contexto celular. Los resultados mostraron que el CTD de NP presenta\nactividad ribonucleasa, no reportado previamente para JUNV, y que interactúa con Z\ninvolucrando residuos hidrofóbicos ubicados en su brazo C terminal.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas