Rol del 2-Iodohexadecanal en el mecanismo de autorregulación de la Glándula Tiroidea

• Autores: Rossich, Luciano Esteban
• Año de publicación: 2017
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Thomasz, Lisa; Mesch, Viviana; Juvenal, Guillermo Juan; Zubillaga, Marcela; Kleiman, Diana; Gauna,Alicia
• Materia: Tiroides; Iodolípidos; 2-IHDA; Ciencia de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Fil: Rossich, Luciano Esteban. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Introducción: El iodo juega un importante papel en la bioquímica y fisiología\ntiroidea. Si bien la TSH es el principal regulador de la función y crecimiento de\nla glándula tiroides, el contenido intratiroideo de iodo es un importante\nregulador de estos parámetros. El exceso de iodo revierte la acción ejercida por\nla TSH tanto in vivo como in vitro. A medida que el aporte de iodo aumenta, se\nincrementa la biosíntesis de las hormonas tiroideas. Sin embargo, cuando la\nconcentración de iodo supera un cierto límite, se pierde la proporcionalidad\nentre ambos parámetros y se inhibe progresivamente la biosíntesis hormonal\n(efecto Wolff-Chaikoff). El bloqueo provocado por el iodo es temporal. Se ha\ndemostrado que para que el iodo ejerza su acción autorregulatoria debe ser\nincorporado a moléculas orgánicas (Elemento XI). Se han postulado como\nintermediarios, lípidos iodados. Uno de ellos es el 2-iodo-hexadecanal (2-\nIHDA).\nObjetivo: Estudiar los parámetros tiroideos regulados por el 2-IHDA tales como\nproliferación celular, función tiroidea y la expresión de genes específicos\ntiroideos y determinar la potencial función de la familia de receptores nucleares\nPPAR (Peroxisome Proliferative Activated Receptor) en el mecanismo de\nacción del 2-IHDA.\nMateriales y Métodos: Células FRTL-5 fueron cultivadas y tratadas durante 24\ny/o 48 h con dosis crecientes de KI, 2-IHDA. Se estudiaron distintos parámetros\nfisiológicos como viabilidad celular, captación y eflujo de 125I, captación de\n3HDOG, niveles de Ca++ libre intracelular, producción de H2O2. Todos estos\nprocesos fisiológicos de la célula tiroidea fueron analizados en asociación a las\nproteínas involucradas NIS, PDS, DUOX1, DUOX2, TPO y Tg, a nivel proteico\n(Western Blot), de RNAm (qRT-PCR) y actividad transcripcional de sus\npromotores. Así mismo se analizaron los factores de transcripción canónicos\ncomo PAX8, NKX2-1 y FOXE1 y su grado de asociación al DNA de los sitios\ndefinidos en las regiones promotoras a través de inmunoprecipitación de\ncromatina (ChIP).\nEstudios desarrollados con plásmidos que expresan proteínas quiméricas\npermitieron determinar la activación específica de los subtipos de PPAR.\nMediante análisis informático se definieron sitios putativos de interacción con el\nADN en las regiones promotoras de los genes Nis, Tpo, Tg, Pax-8, Nkx2-1 y\nFoxe1, a través de ChIP se definió cual de los sitios putativos poseía actividad\nverdadera.\nTambién se realizaron ensayos durante 24 h aplicando agonistas y siRNAs\npara PPAR alfa y PPAR gamma.\nResultados: El iodolípido generó una disminución de la captación de iodo, un\naumento del eflujo del halógeno, inhibición de la captación de desoxiglucosa,\nefecto dual sobre la producción de peroxido de hidrógeno e inhibición de la\nproliferación. Bajo efecto del 2-IHDA se observó disminución de los niveles\nproteicos de NIS, TPO, Tg, PAX8 y FOXE1, aumento de NKX2-1 y efecto dual\nsobre DUOX2. Mismos resultados fueron observados por qRT-PCR y por\nmedio de transfecciones transientes. Mediante ChIP se determinó que el 2-\nIHDA promueve una disminución de la interacción de PAX8 sobre las regiones\npromotoras de Nis, Tg y Tpo y un aumento de NKX2-1 y FOXE1.\nMediante transfecciones transientes con construcciones quiméricas se observó\nque el 2-IHDA promueve la activación de los subtipos alfa y gamma de los\nPPARs. Mediante ChIP se observó un aumento de la interacción de estos\nsubtipos en los sitios putativos definidos in silico mediante la aplicación\nPROMO 3.0.\nLa utilización de agonistas específicos para cada uno de los subtipos además\npermitió diferenciar la acción específica que desarrolla el iodolípido a través de\nellos. Es así que se observó que el 2-IHDA a través de la activación del PPAR\nalfa promueve una inhibición de Nis y Foxe1. El subtipo gamma desarrolla la\ninhibición de Pax8 y Tg.\nConclusión: Los resultados obtenidos demuestran que el 2-IHDA sería el\nprincipal compuesto en la identidad del Elemento XI, y el mismo
Biología molecular
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en Farmacia y Bioquímica