Análisis de técnicas de recuperación antigénica para la detección inmunohistoquímica del virus de la diarrea viral bovina

Autores
Marini, M.R.; Canal, A.M.; Salvetti, N.R.; Ortega, H.H.
Año de publicación
2006
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
In the present work different methods of antigen retrieval were evaluated to allow the immunodetection of the Bovine Viral Diarrhea virus (BVDv) in materials fixed with formol. The effect of the application of proteolytic digestion was analyzed (ficin, trypsin, pepsin, proteinase K) and its combination with treatment in a microwave oven using different concentrations and times of incubation for the primary antibody. The most effective treatment was the one carried out with proteinase K, using 1:30 dilution for the primary antibodies, with overnight incubation at room temperature. We conclude that the formol fixation affects the antigenicity of the BVDv but these effects can be reverted by specific proteolytic digestion allowing the use of the immunohistochemical routine technique for the diagnosis of the disease.
Fil: Marini, M.R. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Patología Básica. Santa Fe, Argentina
Fil: Canal, A.M. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Patología Básica. Santa Fe, Argentina
Fil: Salvetti, N.R. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Anatomía e Histología Embriología. Santa Fe, Argentina
Fil: Ortega, H.H. CONICET. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Santa Fe, Argentina
Fil: Ortega, H.H. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Anatomía e Histología Embriología. Santa Fe, Argentina
En el presente trabajo se evaluaron diferentes métodos de recuperación antigénica para permitir la inmunodetección del virus de la Diarrea Viral Bovina (vDVB) en materiales fijados con formol. Se analizó el efecto de la aplicación de digestión proteolítica (ficina, tripsina, pepsina, proteinasa K) y su combinación con tratamiento en un horno microondas empleando diferentes concentraciones y tiempos de incubación para el anticuerpo primario. El tratamiento más efectivo fue el realizado con proteinasa K, utilizando diluciones de 1:30 para los anticuerpos primarios, con incubación durante toda la noche a temperatura ambiente. Concluimos que la fijación formólica afecta la antigenicidad del vDVB pero estos efectos pueden ser revertidos por digestión proteolítica específica permitiendo la utilización de la inmunohistoquímica como técnica de rutina para el diagnóstico de la enfermedad.
Fuente
InVet, vol. 08, nº1
Materia
DVB
recuperación antigénica
inmunohistoquímica
BVD
antigen retrieval
immunohistochemistry
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Repositorio
Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
Institución
Universidad de Buenos Aires
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En el presente trabajo se evaluaron diferentes métodos de recuperación antigénica para permitir la inmunodetección del virus de la Diarrea Viral Bovina (vDVB) en materiales fijados con formol. Se analizó el efecto de la aplicación de digestión proteolítica (ficina, tripsina, pepsina, proteinasa K) y su combinación con tratamiento en un horno microondas empleando diferentes concentraciones y tiempos de incubación para el anticuerpo primario. El tratamiento más efectivo fue el realizado con proteinasa K, utilizando diluciones de 1:30 para los anticuerpos primarios, con incubación durante toda la noche a temperatura ambiente. Concluimos que la fijación formólica afecta la antigenicidad del vDVB pero estos efectos pueden ser revertidos por digestión proteolítica específica permitiendo la utilización de la inmunohistoquímica como técnica de rutina para el diagnóstico de la enfermedad.
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