Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos

Autores
Cancelarich, Natalia Lorena
Año de publicación
2023
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
tesis doctoral
Estado
versión aceptada
Colaborador/a o director/a de tesis
Basso, Néstor G.
Power, Pablo
Marani, Mariela M.
Miranda, María Victoria
Pérez, Pablo
Nusblat, Alejandro
Descripción
The development of multidrug-resistant bacteria represents a threat to health, making the research for new therapeutic agents imperative. Antimicrobial peptides constitute a promising option. This thesis presents the first isolation and characterization of skin peptides from Pleurodema somuncurense and Odontoprhynus occidentalis. RNA was extracted from the skin, and cDNA were obtained, transfected, and cloned into competent cells. Insert were selected, amplified, and sequenced. Through in silico analysis of the prepro-peptides, certain were selected for Fmoc chemistry synthesis. The peptides were purified by RP-HPLC/MSMS and tested for antimicrobial activity. Three peptides inhibited the growth of E. coli, and one inhibited the growth of S. aureus. Circular dichroism studies showed that two of them adopt ?-helix type structure under specific conditions. Hemolytic activity was determined and one showed low hemolysis percentage at the MIC. The results of several biophysical studies suggest a fusogenic mechanism of action leading to aggregation and alteration of cell morphology. The sequences obtained enrich the databases that serve as a starting point in the design of new therapeutic agents against multidrug-resistant bacteria.
Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
En esta tesis se identificaron y caracterizaron los péptidos de la piel de Pleurodema somuncurense y Odontoprhynus occidentalis. Se extrajo el ARN de la piel y se obtuvieron los ADNc que se transfectaron y clonaron en células competentes. Se realizó la selección de insertos, amplificación y secuenciación de los mismos. Mediante el análisis in silico de los prepro-péptidos, se seleccionaron algunos péptidos maduros para su síntesis utilizando química Fmoc. Estos se purificaron por RP-HPLC/MSMS y se determinó su actividad antimicrobiana. Tres péptidos inhibieron el crecimiento de E. coli y uno el de S. aureus. Estudios de dicroísmo circular mostraron que dos tienden adoptar una estructura tipo ?-hélice en ciertas condiciones. Los péptidos más activos mostraron un bajo porcentaje de hemólisis a la CIM observada para E. coli. Los resultados de diversos estudios biofísicos sugieren un mecanismo de acción de tipo fusogénico que conduciría a la agregación y alteración de la morfología celular. Las secuencias obtenidas enriquecen las bases de datos que sirven como puntapié inicial en el diseño de agentes terapéuticos.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas
Materia
Péptidos
Antimicrobianos
Anfibios
Ciencias de la vida
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Repositorio
Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
Institución
Universidad de Buenos Aires
OAI Identificador
oai:RDI UBA:posgraafa:HWA_7898
Acceder
id RDIUBA_5be82cfcc4dbc124c0969f27ae567a7e
oai_identifier_str oai:RDI UBA:posgraafa:HWA_7898
network_acronym_str RDIUBA
repository_id_str
network_name_str Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
spelling Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianosCancelarich, Natalia LorenaPéptidosAntimicrobianosAnfibiosCiencias de la vidaThe development of multidrug-resistant bacteria represents a threat to health, making the research for new therapeutic agents imperative. Antimicrobial peptides constitute a promising option. This thesis presents the first isolation and characterization of skin peptides from Pleurodema somuncurense and Odontoprhynus occidentalis. RNA was extracted from the skin, and cDNA were obtained, transfected, and cloned into competent cells. Insert were selected, amplified, and sequenced. Through in silico analysis of the prepro-peptides, certain were selected for Fmoc chemistry synthesis. The peptides were purified by RP-HPLC/MSMS and tested for antimicrobial activity. Three peptides inhibited the growth of E. coli, and one inhibited the growth of S. aureus. Circular dichroism studies showed that two of them adopt ?-helix type structure under specific conditions. Hemolytic activity was determined and one showed low hemolysis percentage at the MIC. The results of several biophysical studies suggest a fusogenic mechanism of action leading to aggregation and alteration of cell morphology. The sequences obtained enrich the databases that serve as a starting point in the design of new therapeutic agents against multidrug-resistant bacteria.Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, ArgentinaEn esta tesis se identificaron y caracterizaron los péptidos de la piel de Pleurodema somuncurense y Odontoprhynus occidentalis. Se extrajo el ARN de la piel y se obtuvieron los ADNc que se transfectaron y clonaron en células competentes. Se realizó la selección de insertos, amplificación y secuenciación de los mismos. Mediante el análisis in silico de los prepro-péptidos, se seleccionaron algunos péptidos maduros para su síntesis utilizando química Fmoc. Estos se purificaron por RP-HPLC/MSMS y se determinó su actividad antimicrobiana. Tres péptidos inhibieron el crecimiento de E. coli y uno el de S. aureus. Estudios de dicroísmo circular mostraron que dos tienden adoptar una estructura tipo ?-hélice en ciertas condiciones. Los péptidos más activos mostraron un bajo porcentaje de hemólisis a la CIM observada para E. coli. Los resultados de diversos estudios biofísicos sugieren un mecanismo de acción de tipo fusogénico que conduciría a la agregación y alteración de la morfología celular. Las secuencias obtenidas enriquecen las bases de datos que sirven como puntapié inicial en el diseño de agentes terapéuticos.Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias BiológicasUniversidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y BioquímicaBasso, Néstor G.Power, PabloMarani, Mariela M.Miranda, María VictoriaPérez, PabloNusblat, Alejandro2023-03-14info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06info:ar-repo/semantics/tesisDoctoralapplication/pdfhttp://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7898https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7898.dir/7898.PDFspainfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/reponame:Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Airesinstname:Universidad de Buenos Aires2025-11-27T11:04:19Zoai:RDI UBA:posgraafa:HWA_7898instacron:UBAInstitucionalhttp://repositoriouba.sisbi.uba.ar/Universidad públicahttps://www.uba.ar/http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/oaiserver.cgicferrando@sisbi.uba.arArgentinaopendoar:2025-11-27 11:04:20.567Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires - Universidad de Buenos Airesfalse
dc.title.none.fl_str_mv Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
title Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
spellingShingle Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
Cancelarich, Natalia Lorena
Péptidos
Antimicrobianos
Anfibios
Ciencias de la vida
title_short Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
title_full Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
title_fullStr Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
title_full_unstemmed Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
title_sort Caracterización de péptidos de la piel de anfibios de la Patagonia mediante técnicas de biología molecular. Su aplicación como antimicrobianos
dc.creator.none.fl_str_mv Cancelarich, Natalia Lorena
author Cancelarich, Natalia Lorena
author_facet Cancelarich, Natalia Lorena
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Basso, Néstor G.
Power, Pablo
Marani, Mariela M.
Miranda, María Victoria
Pérez, Pablo
Nusblat, Alejandro
dc.subject.none.fl_str_mv Péptidos
Antimicrobianos
Anfibios
Ciencias de la vida
topic Péptidos
Antimicrobianos
Anfibios
Ciencias de la vida
dc.description.none.fl_txt_mv The development of multidrug-resistant bacteria represents a threat to health, making the research for new therapeutic agents imperative. Antimicrobial peptides constitute a promising option. This thesis presents the first isolation and characterization of skin peptides from Pleurodema somuncurense and Odontoprhynus occidentalis. RNA was extracted from the skin, and cDNA were obtained, transfected, and cloned into competent cells. Insert were selected, amplified, and sequenced. Through in silico analysis of the prepro-peptides, certain were selected for Fmoc chemistry synthesis. The peptides were purified by RP-HPLC/MSMS and tested for antimicrobial activity. Three peptides inhibited the growth of E. coli, and one inhibited the growth of S. aureus. Circular dichroism studies showed that two of them adopt ?-helix type structure under specific conditions. Hemolytic activity was determined and one showed low hemolysis percentage at the MIC. The results of several biophysical studies suggest a fusogenic mechanism of action leading to aggregation and alteration of cell morphology. The sequences obtained enrich the databases that serve as a starting point in the design of new therapeutic agents against multidrug-resistant bacteria.
Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
En esta tesis se identificaron y caracterizaron los péptidos de la piel de Pleurodema somuncurense y Odontoprhynus occidentalis. Se extrajo el ARN de la piel y se obtuvieron los ADNc que se transfectaron y clonaron en células competentes. Se realizó la selección de insertos, amplificación y secuenciación de los mismos. Mediante el análisis in silico de los prepro-péptidos, se seleccionaron algunos péptidos maduros para su síntesis utilizando química Fmoc. Estos se purificaron por RP-HPLC/MSMS y se determinó su actividad antimicrobiana. Tres péptidos inhibieron el crecimiento de E. coli y uno el de S. aureus. Estudios de dicroísmo circular mostraron que dos tienden adoptar una estructura tipo ?-hélice en ciertas condiciones. Los péptidos más activos mostraron un bajo porcentaje de hemólisis a la CIM observada para E. coli. Los resultados de diversos estudios biofísicos sugieren un mecanismo de acción de tipo fusogénico que conduciría a la agregación y alteración de la morfología celular. Las secuencias obtenidas enriquecen las bases de datos que sirven como puntapié inicial en el diseño de agentes terapéuticos.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas
description The development of multidrug-resistant bacteria represents a threat to health, making the research for new therapeutic agents imperative. Antimicrobial peptides constitute a promising option. This thesis presents the first isolation and characterization of skin peptides from Pleurodema somuncurense and Odontoprhynus occidentalis. RNA was extracted from the skin, and cDNA were obtained, transfected, and cloned into competent cells. Insert were selected, amplified, and sequenced. Through in silico analysis of the prepro-peptides, certain were selected for Fmoc chemistry synthesis. The peptides were purified by RP-HPLC/MSMS and tested for antimicrobial activity. Three peptides inhibited the growth of E. coli, and one inhibited the growth of S. aureus. Circular dichroism studies showed that two of them adopt ?-helix type structure under specific conditions. Hemolytic activity was determined and one showed low hemolysis percentage at the MIC. The results of several biophysical studies suggest a fusogenic mechanism of action leading to aggregation and alteration of cell morphology. The sequences obtained enrich the databases that serve as a starting point in the design of new therapeutic agents against multidrug-resistant bacteria.
publishDate 2023
dc.date.none.fl_str_mv 2023-03-14
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
http://purl.org/coar/resource_type/c_db06
info:ar-repo/semantics/tesisDoctoral
format doctoralThesis
status_str acceptedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7898
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7898.dir/7898.PDF
url http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=posgraafa&cl=CL1&d=HWA_7898
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/posgraafa/index/assoc/HWA_7898.dir/7898.PDF
dc.language.none.fl_str_mv spa
language spa
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
publisher.none.fl_str_mv Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
instname:Universidad de Buenos Aires
reponame_str Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
collection Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
instname_str Universidad de Buenos Aires
repository.name.fl_str_mv Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires - Universidad de Buenos Aires
repository.mail.fl_str_mv cferrando@sisbi.uba.ar
_version_ 1849953200424091648
score 12.50043

Publicaciones similares