Expression and purification of recombinant feline interferon in the baculovirus-insect larvae system

Autores
Targovnik, Alexandra Marisa; Villaverde, Marcela Solange; Arregui, Mariana Bernadett; Fogar, Mariela Noemi; Taboga, Oscar Alberto; Glikin, Gerardo Claudio; Finocchiaro, Liliana Maria Elena; Cascone, Osvaldo; Miranda, Maria Victoria
Año de publicación
2014
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
Feline interferons (FeIFNs) are cytokines with antiviral, antitumor and immunomodulatory functions used as therapeutic agents in a variety of veterinary diseases. In this work, FeIFN-α7 and FeIFN-α7xArg containing eight residues of arginine were expressed in Sf9 cells and insect larvae. At 4 days post-infection (dpi), the concentrations of FeIFN-α7 and FeIFN-α7xArg in suspension culture were (1.28 ± 0.15) × 106 U ml−1 and (1.3 ± 0.2) × 106 U ml−1 respectively. The maximum expression levels of FeIFN-α7 and FeIFN-α7xArg were (3.7 ± 0.2) × 106 U ml−1 and (3.5 ± 0.4) × 106 U ml−1 at 2 dpi in Rachiplusia nu larvae and (1.1 ± 0.2) × 106 U ml−1 and (1.0 ± 0.15) × 106 U ml−1 at 5 dpi in Spodoptera frugiperda larvae respectively. R. nu was a better host for FeIFN-α7 and FeIFN-α7xArg expression. The 8xArg tag did not affect the biological activity of FeIFN-α7 and was useful to promote the FeIFN-α7xArg adsorption on ion exchange chromatography (IEC), allowing its purification in a single step from supernatant culture and R. nu larvae. FeIFN-α7xArg was purified from the larval extract with a yield of 70% and a purification factor of 25 free of viruses. We conclude that R. nu larvae are new low-cost hosts for the expression of recombinant FeIFN-α7.
EEA Sáenz Peña
Fil: Targovnik, Alexandra Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Villaverde, Marcela Solange. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo". Unidad de Transferencia Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Arregui, Mariana Bernadett. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Fogar, Mariela Noemi. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Sáenz Peña; Argentina
Fil: Taboga, Oscar Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentina
Fil: Glikin, Gerardo Claudio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo". Unidad de Transferencia Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Finocchiaro, Liliana Maria Elena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo". Unidad de Transferencia Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Miranda, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fuente
Process Biochemistry 49 (6) : 917-926 (June 2014)
Materia
Interferonas
Felidae
Gato
Citoquinas
Baculovirus
Cromatografía de Cambio Iónico
Purificación
Interferons
Cats
Cytokines
Ion Exchange Chromatography
Purification
Nivel de accesibilidad
acceso restringido
Condiciones de uso
Repositorio
INTA Digital (INTA)
Institución
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
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The maximum expression levels of FeIFN-α7 and FeIFN-α7xArg were (3.7 ± 0.2) × 106 U ml−1 and (3.5 ± 0.4) × 106 U ml−1 at 2 dpi in Rachiplusia nu larvae and (1.1 ± 0.2) × 106 U ml−1 and (1.0 ± 0.15) × 106 U ml−1 at 5 dpi in Spodoptera frugiperda larvae respectively. R. nu was a better host for FeIFN-α7 and FeIFN-α7xArg expression. The 8xArg tag did not affect the biological activity of FeIFN-α7 and was useful to promote the FeIFN-α7xArg adsorption on ion exchange chromatography (IEC), allowing its purification in a single step from supernatant culture and R. nu larvae. FeIFN-α7xArg was purified from the larval extract with a yield of 70% and a purification factor of 25 free of viruses. We conclude that R. nu larvae are new low-cost hosts for the expression of recombinant FeIFN-α7.EEA Sáenz PeñaFil: Targovnik, Alexandra Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Villaverde, Marcela Solange. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo". Unidad de Transferencia Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Arregui, Mariana Bernadett. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Fogar, Mariela Noemi. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Sáenz Peña; ArgentinaFil: Taboga, Oscar Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Glikin, Gerardo Claudio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo". Unidad de Transferencia Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Finocchiaro, Liliana Maria Elena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo". Unidad de Transferencia Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Miranda, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. 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EEA Sáenz Peña
Fil: Targovnik, Alexandra Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
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