Cinética de transcriptos de genes inmediatos y tardíos del herpes virus bovino tipo 4 (BoHV-4) en cultivos primarios de endometrio bovino
- Autores
- Romeo, Florencia; Louge Uriarte, Enrique Leopoldo; Pereyra, Susana Beatriz; Spetter Lucas, Maximiliano Joaquín; Gonzalez Altamiranda, Erika Analia; Odeón, Anselmo Carlos; Perez, Sandra; Verna, Andrea Elizabeth
- Año de publicación
- 2019
- Idioma
- español castellano
- Tipo de recurso
- documento de conferencia
- Estado
- versión publicada
- Descripción
- Introducción y Objetivos: La metritis post parto afecta de forma negativa la eficiencia reproductiva en vacas lecheras. Generalmente, los patógenos implicados son Escherichia coli y Trueperella pyogenes, pero la infección viral por herpesvirus (BoHV-4) y el virus de la diarrea viral bovina (vDVB) también son relevantes en la etiología de esta patología. El BoHV-4 es un gammaherpesvirus caracterizado por su baja virulencia y tropismo por las células endometriales. Su replicación exitosa se atribuye a eventos post ingreso a la célula. La activación de manera eficiente del gen Inmediato temprano 2 (IE2) es un desencadenante molecular clave en la replicación del BoHV-4, seguido de la activación de genes tardíos como los que codifican para importantes glicoproteínas (g) de la envoltura (gB, gH y gL). La gB participa en la adhesión a la célula huésped y es indispensable para la replicación lítica del BoHV-4, mientras que la gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y forma un heterodímero con gH. Objetivo: Analizar la cinética de expresión de transcriptos de BoHV-4 en cultivo primario de células endometriales bovinas (CPCEB) infectadas naturalmente con vDVB. Materiales y Métodos: Células: CPCEB obtenido por el método de Tebaldi. Dichas células se evaluaron para el vDVB por IFD, confirmándose la presencia del antígeno viral en las mismas (CEB DVB+); no se observó efecto citopático. Asimismo se utilizaron células endometriales bovinas sin infectar (CEB Control). Se prepararon placas de 24 wells con CEB DVB+ y CEB Control. Las células se infectaron con la cepa 07/435 de BoHV-4 a una MOI de 0,5. Luego de distintas horas post infección (p.i.) (6, 8, 12, 24, 30, 48 y 64 hs) se levantaron las células, se extrajo el ARN y se amplificaron los genes que codifican para IE2, gB, gH y gL mediante RT-PCR. Resultados: Se observó el efecto citopático (ECP) característico del BoHV-4 en las CEB Control transcurridas las 30hs p.i., mientras que para las CEB DVB+ el ECP fue evidente luego de 48hs p.i. En lo que respecta a la expresión génica se observaron pequeñas variaciones temporales en su cinética. La expresión del gen temprano IE2 no se detectó luego de 6hs p.i. en ninguno de los cultivos infectados. No se observó variación en la cinética de expresión para la gB en ambos cultivos, siendo el comienzo de la expresión a las 24 hs p.i. al igual que en células MDBK. No obstante en las CEB Control la expresión de los genes que codifican para gH y gL se detectó a partir de 12 y 24 hs p.i. respectivamente, lo cual coincide con un estudio realizado en células MDBK. Sin embargo en las CEB DVB+ la expresión para ambos genes se observó a partir de 30hs p.i. Conclusiones: La infección natural de células endometriales bovinas con el virus de la diarrea viral bovina afectaría de forma temporal la cinética de replicación del BoHV-4, evidenciándose por un retraso en la expresión de los genes tardíos. Los resultados obtenidos en éste estudio demuestran la importancia de utilizar cultivos celulares y suero fetal bovino libre de vDVB para evitar interferencias en estudios in vitro con BoHV-4 en particular y en herpesvirus en general.
Fil: Romeo, Florencia. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Louge Uriarte, Enrique Leopoldo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Pereyra, Susana Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina
Fil: Spetter Lucas, Maximiliano Joaquín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentina
Fil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina
Fil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina
Fil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentina
XV Congreso Argentino de Microbiología; V Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos; V Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos y XIV Congreso Argentino de Microbiología General
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
Asociación Argentina de Microbiología - Materia
-
BoHV-4
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Cultivos primarios - Nivel de accesibilidad
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La activación de manera eficiente del gen Inmediato temprano 2 (IE2) es un desencadenante molecular clave en la replicación del BoHV-4, seguido de la activación de genes tardíos como los que codifican para importantes glicoproteínas (g) de la envoltura (gB, gH y gL). La gB participa en la adhesión a la célula huésped y es indispensable para la replicación lítica del BoHV-4, mientras que la gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y forma un heterodímero con gH. Objetivo: Analizar la cinética de expresión de transcriptos de BoHV-4 en cultivo primario de células endometriales bovinas (CPCEB) infectadas naturalmente con vDVB. Materiales y Métodos: Células: CPCEB obtenido por el método de Tebaldi. Dichas células se evaluaron para el vDVB por IFD, confirmándose la presencia del antígeno viral en las mismas (CEB DVB+); no se observó efecto citopático. Asimismo se utilizaron células endometriales bovinas sin infectar (CEB Control). 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No obstante en las CEB Control la expresión de los genes que codifican para gH y gL se detectó a partir de 12 y 24 hs p.i. respectivamente, lo cual coincide con un estudio realizado en células MDBK. Sin embargo en las CEB DVB+ la expresión para ambos genes se observó a partir de 30hs p.i. Conclusiones: La infección natural de células endometriales bovinas con el virus de la diarrea viral bovina afectaría de forma temporal la cinética de replicación del BoHV-4, evidenciándose por un retraso en la expresión de los genes tardíos. Los resultados obtenidos en éste estudio demuestran la importancia de utilizar cultivos celulares y suero fetal bovino libre de vDVB para evitar interferencias en estudios in vitro con BoHV-4 en particular y en herpesvirus en general.Fil: Romeo, Florencia. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica; Argentina. 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La gB participa en la adhesión a la célula huésped y es indispensable para la replicación lítica del BoHV-4, mientras que la gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y forma un heterodímero con gH. Objetivo: Analizar la cinética de expresión de transcriptos de BoHV-4 en cultivo primario de células endometriales bovinas (CPCEB) infectadas naturalmente con vDVB. Materiales y Métodos: Células: CPCEB obtenido por el método de Tebaldi. Dichas células se evaluaron para el vDVB por IFD, confirmándose la presencia del antígeno viral en las mismas (CEB DVB+); no se observó efecto citopático. Asimismo se utilizaron células endometriales bovinas sin infectar (CEB Control). Se prepararon placas de 24 wells con CEB DVB+ y CEB Control. Las células se infectaron con la cepa 07/435 de BoHV-4 a una MOI de 0,5. Luego de distintas horas post infección (p.i.) (6, 8, 12, 24, 30, 48 y 64 hs) se levantaron las células, se extrajo el ARN y se amplificaron los genes que codifican para IE2, gB, gH y gL mediante RT-PCR. Resultados: Se observó el efecto citopático (ECP) característico del BoHV-4 en las CEB Control transcurridas las 30hs p.i., mientras que para las CEB DVB+ el ECP fue evidente luego de 48hs p.i. En lo que respecta a la expresión génica se observaron pequeñas variaciones temporales en su cinética. La expresión del gen temprano IE2 no se detectó luego de 6hs p.i. en ninguno de los cultivos infectados. No se observó variación en la cinética de expresión para la gB en ambos cultivos, siendo el comienzo de la expresión a las 24 hs p.i. al igual que en células MDBK. No obstante en las CEB Control la expresión de los genes que codifican para gH y gL se detectó a partir de 12 y 24 hs p.i. respectivamente, lo cual coincide con un estudio realizado en células MDBK. Sin embargo en las CEB DVB+ la expresión para ambos genes se observó a partir de 30hs p.i. Conclusiones: La infección natural de células endometriales bovinas con el virus de la diarrea viral bovina afectaría de forma temporal la cinética de replicación del BoHV-4, evidenciándose por un retraso en la expresión de los genes tardíos. Los resultados obtenidos en éste estudio demuestran la importancia de utilizar cultivos celulares y suero fetal bovino libre de vDVB para evitar interferencias en estudios in vitro con BoHV-4 en particular y en herpesvirus en general. Fil: Romeo, Florencia. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Louge Uriarte, Enrique Leopoldo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Pereyra, Susana Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina Fil: Spetter Lucas, Maximiliano Joaquín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. 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Introducción y Objetivos: La metritis post parto afecta de forma negativa la eficiencia reproductiva en vacas lecheras. Generalmente, los patógenos implicados son Escherichia coli y Trueperella pyogenes, pero la infección viral por herpesvirus (BoHV-4) y el virus de la diarrea viral bovina (vDVB) también son relevantes en la etiología de esta patología. El BoHV-4 es un gammaherpesvirus caracterizado por su baja virulencia y tropismo por las células endometriales. Su replicación exitosa se atribuye a eventos post ingreso a la célula. La activación de manera eficiente del gen Inmediato temprano 2 (IE2) es un desencadenante molecular clave en la replicación del BoHV-4, seguido de la activación de genes tardíos como los que codifican para importantes glicoproteínas (g) de la envoltura (gB, gH y gL). La gB participa en la adhesión a la célula huésped y es indispensable para la replicación lítica del BoHV-4, mientras que la gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y forma un heterodímero con gH. Objetivo: Analizar la cinética de expresión de transcriptos de BoHV-4 en cultivo primario de células endometriales bovinas (CPCEB) infectadas naturalmente con vDVB. Materiales y Métodos: Células: CPCEB obtenido por el método de Tebaldi. Dichas células se evaluaron para el vDVB por IFD, confirmándose la presencia del antígeno viral en las mismas (CEB DVB+); no se observó efecto citopático. Asimismo se utilizaron células endometriales bovinas sin infectar (CEB Control). Se prepararon placas de 24 wells con CEB DVB+ y CEB Control. Las células se infectaron con la cepa 07/435 de BoHV-4 a una MOI de 0,5. Luego de distintas horas post infección (p.i.) (6, 8, 12, 24, 30, 48 y 64 hs) se levantaron las células, se extrajo el ARN y se amplificaron los genes que codifican para IE2, gB, gH y gL mediante RT-PCR. Resultados: Se observó el efecto citopático (ECP) característico del BoHV-4 en las CEB Control transcurridas las 30hs p.i., mientras que para las CEB DVB+ el ECP fue evidente luego de 48hs p.i. En lo que respecta a la expresión génica se observaron pequeñas variaciones temporales en su cinética. La expresión del gen temprano IE2 no se detectó luego de 6hs p.i. en ninguno de los cultivos infectados. No se observó variación en la cinética de expresión para la gB en ambos cultivos, siendo el comienzo de la expresión a las 24 hs p.i. al igual que en células MDBK. No obstante en las CEB Control la expresión de los genes que codifican para gH y gL se detectó a partir de 12 y 24 hs p.i. respectivamente, lo cual coincide con un estudio realizado en células MDBK. Sin embargo en las CEB DVB+ la expresión para ambos genes se observó a partir de 30hs p.i. Conclusiones: La infección natural de células endometriales bovinas con el virus de la diarrea viral bovina afectaría de forma temporal la cinética de replicación del BoHV-4, evidenciándose por un retraso en la expresión de los genes tardíos. Los resultados obtenidos en éste estudio demuestran la importancia de utilizar cultivos celulares y suero fetal bovino libre de vDVB para evitar interferencias en estudios in vitro con BoHV-4 en particular y en herpesvirus en general. |
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