Diagnóstico molecular temprano de Chagas vertical por LAMP a partir de muestras de sangre líquida y en soporte sólido: Transferencia a instituciones de salud pública en América Lat...

Autores
Parada Barba, María Cristina; Montesinos Sanchis, Elena; Longhi, Silvia Andrea; García Casares, Lady Juliette; Muñoz Calderon, Arturo Alejandro; Alonso Padilla, Julio; Schijman, Alejandro Gabriel
Año de publicación
2023
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
El control de la transmisión materno-fetal del Trypanosoma cruzi, causante de Chagas vertical (ChV), es prioridad en salud pública, pues esta forma de transmisión es más frecuente en donde se ha logrado el control vectorial o en regiones no-endémicas, siendo identificable al nacimiento y tratable con alta eficiencia y probabilidad de demostración de cura en el corto plazo. Se planteó la validación analítica y transferencia de la amplificación isotérmica mediada por asas (LAMP) para diagnóstico molecular temprano de ChV en centros de salud pública en áreas endémicas. Métodos: Se optimizó la metodología evaluando combinaciones de métodos rápidos de extracción de ADN acoplados al LAMP, adaptables a laboratorios ubicados en maternidades en áreas endémicas: 1. PURE (Eiken Chemical Co, Japón) y 2. PrinterLab (impresora 3D modificada, AI BioSciences, EEUU). Se emplearon muestras de sangre humana seronegativa inoculada con T. cruzi de cultivo (cepas TcI, TcII y TcVI) en heparina como anticoagulante (30 µls) o en porciones de sacabocados de 3- y 6-mm de spots de 125 µl en tarjetas FTA® (Qiagen, UK) o 30 µls en Whatman 903™ (GE Healthcare, UK). Se comparó la amplificación empleando baños térmicos AccuBlock TM (LabNet, EEUU) o incubador Loopamp LF-160 (Eiken) y visualización a ojo desnudo, usando el dispositivo LF-160 o visor fluorescente P51(minipcr bio ®,EEUU). Las mejores condiciones mostraron un límite de detección (LoD95) en al menos 20 réplicas de 5 y 20 parásitos/mL, para sangre-heparina y FTA, respectivamente. El papel Whatman fue descartado por arrojar resultados falsos positivos. Se realizó la transferencia del LAMP y capacitó personal de 11 maternidades del sistema público de salud: Combinación PURE-LAMP (LF-160) a 5 sitios de Bolivia, 2 Paraguay y 2 Argentina y PURE-LAMP (AccuBlock – P51) a 2 maternidades argentinas. Se construyeron paneles de aptitud como sistema de control externo de calidad del LAMP para laboratorios participantes. Se transfirió la metodología LAMP para diagnóstico de ChV a maternidades de área endémica, en proceso de validación clínica. De demostrarse una certeza diagnóstica similar a la PCR podría considerarse método rápido de diagnóstico molecular en puntos de atención e incorporarse al algoritmo diagnóstico de ChV.
Fil: Parada Barba, María Cristina. Universidad de Barcelona; España. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Montesinos Sanchis, Elena. Instituto de Salud Carlos III; España
Fil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: García Casares, Lady Juliette. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Alonso Padilla, Julio. Instituto de Salud Carlos III; España. Universidad de Barcelona; España
Fil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
XVIII Jornadas sobre la Enfermedad de Chagas
Barcelona
España
Instituto de Salud Global de Barcelona
Materia
TRYPANOSOMA CRUZI
CHAGAS VERTICAL
DIAGNÓSTICO
LAMP
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
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Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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Se planteó la validación analítica y transferencia de la amplificación isotérmica mediada por asas (LAMP) para diagnóstico molecular temprano de ChV en centros de salud pública en áreas endémicas. Métodos: Se optimizó la metodología evaluando combinaciones de métodos rápidos de extracción de ADN acoplados al LAMP, adaptables a laboratorios ubicados en maternidades en áreas endémicas: 1. PURE (Eiken Chemical Co, Japón) y 2. PrinterLab (impresora 3D modificada, AI BioSciences, EEUU). Se emplearon muestras de sangre humana seronegativa inoculada con T. cruzi de cultivo (cepas TcI, TcII y TcVI) en heparina como anticoagulante (30 µls) o en porciones de sacabocados de 3- y 6-mm de spots de 125 µl en tarjetas FTA® (Qiagen, UK) o 30 µls en Whatman 903™ (GE Healthcare, UK). Se comparó la amplificación empleando baños térmicos AccuBlock TM (LabNet, EEUU) o incubador Loopamp LF-160 (Eiken) y visualización a ojo desnudo, usando el dispositivo LF-160 o visor fluorescente P51(minipcr bio ®,EEUU). 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Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Montesinos Sanchis, Elena. Instituto de Salud Carlos III; EspañaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: García Casares, Lady Juliette. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Alonso Padilla, Julio. Instituto de Salud Carlos III; España. Universidad de Barcelona; EspañaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. 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Fil: Parada Barba, María Cristina. Universidad de Barcelona; España. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
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