Análisis genético comparativo de glutatión s- transferasa en Fasciola hepatica sensible y resistente a triclabendazole
- Autores
- Fernandez, Vanesa; Lamenza, Pamela; Ortiz Oblitas, Pedro; Solana, Hugo Daniel
- Año de publicación
- 2013
- Idioma
- español castellano
- Tipo de recurso
- documento de conferencia
- Estado
- versión publicada
- Descripción
- El trematodo Fasciola hepatica provoca una zoonosis parasitaria de impacto mundial. Ante dicha parasitosis se utiliza triclabendazole (TCBZ). La resistencia de F. hepática a TCBZ a evolucionado en todo el mundo requiriéndose ampliar los conocimientos de los mecanismos que expresan dicho fenómeno. Trabajos previos han demostrado que en una cepa TCBZ resistente (TCBZ-R) existe una mayor actividad detoxificativa por parte de la enzima Glutatión S-Transferasa (GST). En el presente trabajo se evaluó comparativamente en F. hepatica susceptible (TCBZ-S) y resistente (TCBZ-R) la expresión del ARNm para GST y la secuencia del gen respectivo (genGST). Se infestaron artificialmente dos ovinos adultos sanos con 200 metacercarias de I) cepa Cullompton (TCBZ-S), II) cepa Sligo (TCBZ-R). Cuatro meses después se capturaron las fasciolas adultas las cuales fueron procesadas para obtención de ARN total. Se diseñaron los primeros específicos y mediante RT-PCR se cuantificó mediante ImageJ ® la expresión del ARNm para GST. Posteriormente dichos amplicones fueron recuperados, purificados y ligados al vector comercial TOPO TA cloning kit (Invitrogen K457501) y secuenciados mediante servicios externos en un ABI PRISM utilizando oligonucleótidos que hibridan en el vector con el posterior análisis bioinformático. En el análisis del ARNm para GST se determinó que en la cepa resistente (Sligo) existe una expresión 1,5 veces mayor que la generada en la cepa susceptible Cullomptom. Los análisis de comparación de secuencias de nucleótidos se realizaron mediante blastx, arrojando valores de entre 91 y 100% de identidad con otras secuencias previamente identificadas de GST de Fasciola hepatica. En el análisis comparativo de la secuencia génica del gen GST de ambas cepas se detectaron al menos 2 mutaciones transversionales y 2 mutaciones transicionales en el gen GST de la cepa TCBZ-R. Estos resultados contribuyen a la comprensión de los mecanismos de resistencia a TCBZ por parte del trematodo F. hepatica.
Fil: Fernandez, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentina
Fil: Lamenza, Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina
Fil: Ortiz Oblitas, Pedro. Universidad de Cajamarca. Facultad de Ciencias Veterinarias; Perú
Fil: Solana, Hugo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina
VIII Encuentro Biólogos en Red
Mar del Plata
Argentina
Asociación de Jóvenes Investigadores en Formación
Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Materia
-
Fasciola hepatica
Triclabendazole
Resistencia
Glutation S-Transferasa - Nivel de accesibilidad
- acceso abierto
- Condiciones de uso
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Se infestaron artificialmente dos ovinos adultos sanos con 200 metacercarias de I) cepa Cullompton (TCBZ-S), II) cepa Sligo (TCBZ-R). Cuatro meses después se capturaron las fasciolas adultas las cuales fueron procesadas para obtención de ARN total. Se diseñaron los primeros específicos y mediante RT-PCR se cuantificó mediante ImageJ ® la expresión del ARNm para GST. Posteriormente dichos amplicones fueron recuperados, purificados y ligados al vector comercial TOPO TA cloning kit (Invitrogen K457501) y secuenciados mediante servicios externos en un ABI PRISM utilizando oligonucleótidos que hibridan en el vector con el posterior análisis bioinformático. En el análisis del ARNm para GST se determinó que en la cepa resistente (Sligo) existe una expresión 1,5 veces mayor que la generada en la cepa susceptible Cullomptom. 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El trematodo Fasciola hepatica provoca una zoonosis parasitaria de impacto mundial. Ante dicha parasitosis se utiliza triclabendazole (TCBZ). La resistencia de F. hepática a TCBZ a evolucionado en todo el mundo requiriéndose ampliar los conocimientos de los mecanismos que expresan dicho fenómeno. Trabajos previos han demostrado que en una cepa TCBZ resistente (TCBZ-R) existe una mayor actividad detoxificativa por parte de la enzima Glutatión S-Transferasa (GST). En el presente trabajo se evaluó comparativamente en F. hepatica susceptible (TCBZ-S) y resistente (TCBZ-R) la expresión del ARNm para GST y la secuencia del gen respectivo (genGST). Se infestaron artificialmente dos ovinos adultos sanos con 200 metacercarias de I) cepa Cullompton (TCBZ-S), II) cepa Sligo (TCBZ-R). Cuatro meses después se capturaron las fasciolas adultas las cuales fueron procesadas para obtención de ARN total. Se diseñaron los primeros específicos y mediante RT-PCR se cuantificó mediante ImageJ ® la expresión del ARNm para GST. Posteriormente dichos amplicones fueron recuperados, purificados y ligados al vector comercial TOPO TA cloning kit (Invitrogen K457501) y secuenciados mediante servicios externos en un ABI PRISM utilizando oligonucleótidos que hibridan en el vector con el posterior análisis bioinformático. En el análisis del ARNm para GST se determinó que en la cepa resistente (Sligo) existe una expresión 1,5 veces mayor que la generada en la cepa susceptible Cullomptom. Los análisis de comparación de secuencias de nucleótidos se realizaron mediante blastx, arrojando valores de entre 91 y 100% de identidad con otras secuencias previamente identificadas de GST de Fasciola hepatica. En el análisis comparativo de la secuencia génica del gen GST de ambas cepas se detectaron al menos 2 mutaciones transversionales y 2 mutaciones transicionales en el gen GST de la cepa TCBZ-R. Estos resultados contribuyen a la comprensión de los mecanismos de resistencia a TCBZ por parte del trematodo F. hepatica. |
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