La actividad opsonizante de los anticuerpos anti-BLSOmp31 promueve la fagocitosis y destrucción de Brucella canis por neutrófilos caninos

Autores
Clausse, María; Díaz, Alejandra Graciela; Ghersi, Giselle; Zylberman, Vanesa; Goldbaum, Fernando Alberto; Estein, Silvia Marcela
Año de publicación
2016
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
La inmunización con la proteína BLSOmp31 induce una respuesta humoral significativa en caninos. Dado que la respuesta humoral es importante contra las brucelas rugosas, se diseñó un ensayo para estudiar en caninos: I) la capacidad opsonizante los anticuerpos anti-BLSOmp31 y II) la destrucción de Brucella canis mediada por neutrófilos.Se inmunizaron Beagles con BLSOmp31 adsorbida en Al(OH)3. Para la obtención de los fagocitos se incubó sangre canina heparinizada con 3% Dextran durante 1 hora. Los leucocitos del sobrenadante se suspendieron en tampón fosfato salino y se separaron mediante centrifugación sobre gradiente de Ficoll Hypaque. El pellet se lavó y suspendió en solución de Hanks con Ca++-Mg++ (HBSS). Una suspensión de B. canis RM6/66 en HBSS (1x108 Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ml) y se incubó con 10% de suero inactivado estéril de cada perro (30 min,37°C,en agitación). Luego se incubaron los neutrófilos (1x106células/ml) y las bacterias (1x108UFC/ml) en agitación a 37°C. A los 0, 30 y 75 minutos, se separaron por centrifugación las células del sobrenadante (bacterias extracelulares) y este último se cultivó a 37°C para el recuento de UFC. Posteriormente, se lisaron las células para determinar número de bacterias intracelulares.En concordancia con estudios que demuestran un efecto inhibitorio de Brucella spp. sobre los neutrófilos, no se observó lisis de la bacteria sola u opsonizada con suero control. Si bien hubo variabilidad individual, la evidente disminución de los conteos bacterianos totales (35%-70%) demuestra que los anticuerpos inducidos por BLSOmp31 estimularon la fagocitosis y potenciaron la destrucción efectiva de B. canis.
Fil: Clausse, María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina
Fil: Díaz, Alejandra Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Sanidad Animal y Medicina Preventiva; Argentina
Fil: Ghersi, Giselle. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Zylberman, Vanesa. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Goldbaum, Fernando Alberto. Inmunova S.A; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Estein, Silvia Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina
VII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria
Tandil
Argentina
Asociación Argentina Inmunología Veterinaria
Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias
Materia
BLSOmp31
Caninos
Anticuerpos
Neutrofilos
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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Los leucocitos del sobrenadante se suspendieron en tampón fosfato salino y se separaron mediante centrifugación sobre gradiente de Ficoll Hypaque. El pellet se lavó y suspendió en solución de Hanks con Ca++-Mg++ (HBSS). Una suspensión de B. canis RM6/66 en HBSS (1x108 Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ml) y se incubó con 10% de suero inactivado estéril de cada perro (30 min,37°C,en agitación). Luego se incubaron los neutrófilos (1x106células/ml) y las bacterias (1x108UFC/ml) en agitación a 37°C. A los 0, 30 y 75 minutos, se separaron por centrifugación las células del sobrenadante (bacterias extracelulares) y este último se cultivó a 37°C para el recuento de UFC. Posteriormente, se lisaron las células para determinar número de bacterias intracelulares.En concordancia con estudios que demuestran un efecto inhibitorio de Brucella spp. sobre los neutrófilos, no se observó lisis de la bacteria sola u opsonizada con suero control. Si bien hubo variabilidad individual, la evidente disminución de los conteos bacterianos totales (35%-70%) demuestra que los anticuerpos inducidos por BLSOmp31 estimularon la fagocitosis y potenciaron la destrucción efectiva de B. canis.Fil: Clausse, María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Díaz, Alejandra Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Sanidad Animal y Medicina Preventiva; ArgentinaFil: Ghersi, Giselle. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Zylberman, Vanesa. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Inmunova S.A; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Estein, Silvia Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. 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Fil: Ghersi, Giselle. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Zylberman, Vanesa. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Goldbaum, Fernando Alberto. Inmunova S.A; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
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