Estandarización de dos PCR multiplex como base de un test de genotipado para pejerrey : Odontesthes bonariensis

Autores
Sapino, Román; Arranz, Silvia E; Diaz, Juan; Faggiani, Mariano; Villanova, Gabriela V
Año de publicación
2018
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión aceptada
Descripción
El pejerrey bonaerense es una especie de gran importancia económica en Argentina. La piscicultura de pejerrey data de varias décadas en las que se ha poblado o repoblado ambientes con larvas. A pesar de la importancia de esta especie, la información sobre la diversidad genética de sus poblaciones, que sirva para la mejora de su producción o para la mitigación del impacto de las resiembras, es escasa. En este trabajo se propone el desarrollo de un test de genotipado basado en dos reacciones de PCR multiplex utilizando marcadores microsatélites. Se seleccionaron 13 marcadores descriptos en la bibliografía que fueron estandarizados. Luego, los marcadores se evaluaron en una población silvestre (n=20). Se extrajo el ADN a partir de tejido de cada individuo y se amplifico por PCR los 13 marcadores microsatélites. Los productos de amplificación fueron resueltos en geles de poliacrilamida teñidos con plata. Para cada individuo se obtuvo un genotipo. Para cada locus, se determinó el número de alelos, heterocigocidad observada y esperada, frecuencia de alelos nulos, contenidos de información polimórfica (PIC), y probabilidad de exclusión. Teniendo en cuenta estos parámetros, se seleccionaron 7 loci que fueron combinados en dos PCR multiplex M1 y M2 de acuerdo a los tamaños de los fragmentos que produce su amplificación. Los cebadores se marcaron fluorescentemente, y se estandarizaron las condiciones para M1 y M2. Las amplificaciones se evaluaron por electroforesis capilar. Dichas multiplex constituyen la base del Test de genotipado y grado de parentesco para pejerrey. Esta herramienta permitirá evaluar la diversidad genética y el grado de parentesco existente entre los reproductores de los centros de cultivo evitando la depresión consanguínea
Fil: Sapino, Román. Facultad de Ciencias y Bioquímicas - Universidad Nacional de Rosario.
Fil: Arranz, Silvia E. Facultad de Ciencias y Bioquímicas - Universidad Nacional de Rosario.
Fil: Diaz, Juan. Facultad de Ciencias y Bioquímicas - Universidad Nacional de Rosario.
Fil: Faggiani, Mariano. Centro Científico, Tecnológico y Educativo "Acuario del Río Paraná".
Fil: Villanova, Gabriela V. Centro Científico, Tecnológico y Educativo "Acuario del Río Paraná".
Materia
Genética
Piscicultura
Genotipo
Microsatélites
Pejerrey
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by/2.5/ar/
Repositorio
Biblioteca Digital (UNCu)
Institución
Universidad Nacional de Cuyo
OAI Identificador
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Fil: Sapino, Román. Facultad de Ciencias y Bioquímicas - Universidad Nacional de Rosario.
Fil: Arranz, Silvia E. Facultad de Ciencias y Bioquímicas - Universidad Nacional de Rosario.
Fil: Diaz, Juan. Facultad de Ciencias y Bioquímicas - Universidad Nacional de Rosario.
Fil: Faggiani, Mariano. Centro Científico, Tecnológico y Educativo "Acuario del Río Paraná".
Fil: Villanova, Gabriela V. Centro Científico, Tecnológico y Educativo "Acuario del Río Paraná".
description El pejerrey bonaerense es una especie de gran importancia económica en Argentina. La piscicultura de pejerrey data de varias décadas en las que se ha poblado o repoblado ambientes con larvas. A pesar de la importancia de esta especie, la información sobre la diversidad genética de sus poblaciones, que sirva para la mejora de su producción o para la mitigación del impacto de las resiembras, es escasa. En este trabajo se propone el desarrollo de un test de genotipado basado en dos reacciones de PCR multiplex utilizando marcadores microsatélites. Se seleccionaron 13 marcadores descriptos en la bibliografía que fueron estandarizados. Luego, los marcadores se evaluaron en una población silvestre (n=20). Se extrajo el ADN a partir de tejido de cada individuo y se amplifico por PCR los 13 marcadores microsatélites. Los productos de amplificación fueron resueltos en geles de poliacrilamida teñidos con plata. Para cada individuo se obtuvo un genotipo. Para cada locus, se determinó el número de alelos, heterocigocidad observada y esperada, frecuencia de alelos nulos, contenidos de información polimórfica (PIC), y probabilidad de exclusión. Teniendo en cuenta estos parámetros, se seleccionaron 7 loci que fueron combinados en dos PCR multiplex M1 y M2 de acuerdo a los tamaños de los fragmentos que produce su amplificación. Los cebadores se marcaron fluorescentemente, y se estandarizaron las condiciones para M1 y M2. Las amplificaciones se evaluaron por electroforesis capilar. Dichas multiplex constituyen la base del Test de genotipado y grado de parentesco para pejerrey. Esta herramienta permitirá evaluar la diversidad genética y el grado de parentesco existente entre los reproductores de los centros de cultivo evitando la depresión consanguínea
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