Desarrollo de sistemas de expresión integrativos y no integrativos para la producción de biofármacos en plantas de tabaco

• Autores: Wirth, Sonia Alejandra
• Año de publicación: 2005
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Bravo Almonacid, Fernando Félix
• Materia: ACTIVIDAD BIOLOGICA; AGRICULTURA MOLECULAR; APOPLASTO; CLOROPLASTOS; HEGF; PLANTAS TRANSPLASTOMICAS; TABACO TRANSGENICO; VECTOR VIRAL; BIOLOGICAL ACTIVITY; MOLECULAR FARMING; APOPLAST; CHLOROPLASTS; HEGF; TRANSPLASTOMIC; TRANSGENIC TOBACCO; VIRAL VECTOR
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En este trabajo se analizó la producción del factor de crecimiento epidérmico humano (hEGF) en plantas de tabaco, utilizando sistemas de expresión integrativos y no integrativos. Se comparó la expresión de hEGF en el citoplasma y el apoplasto de plantas transgénicas de tabaco, utilizando distintos promotores y secuencias activadoras de la traducción, así como en el citoplasma y apoplasto de plantas infectadas con dos vectores virales derivados de PVX. Asimismo, se verificó la actividad biológica del hEGF expresado en el apoplasto de ambos sistemas, en dos ensayos distintos, demostrándose un comportamiento similar al rhEGF de origen comercial. Además, se constató la rizosecreción de hEGF en un sistema de producción en hidroponia. Por otra parte, se diseñaron dos vectores para implementar la técnica de transformación de cloroplastos de tabaco. Mediante cuatro construcciones distintas se analizó la expresión de hEGF en plantas transplastómicas, lo que permitió percibir la complejidad de los sistemas de regulación genética plastídica. Además, se evaluó la expresión en cloroplastos de tabaco de la hormona de crecimiento bovina (bGH) y de los antígenos de Toxoplasma gondii, SAG 1 y Gra 4.
Human epidermal growth factor (hEGF) was expressed in tobacco plants using integrative and non-integrative systems. hEGF production was compared between cytoplasm and apoplast of transgenic tobacco plants using different promoter and translational enhancer sequences, and in the cytoplasm and the apoplast of plants infected by two distinct PVX derived viral vectors. hEGF biological activity was assessed by two different assays, and a similar behavior to commercial rhEGF was demonstrated. Also, an hydroponic system was used for hEGF production by rizosecretion in apoplastic transgenic plants. On the other hand, we designed two vectors to establish a chloroplast transformation protocol. Four different genetic constructions allowed us to analyze hEGF expression in transplastomic plants, unveiling the complexity of the plastid genetic regulation networks. In addition, expression of bovine growth hormone (bGH) and the Toxoplasma gondii antigens SAG 1 and Gra 4, in tobacco chloroplasts was studied.
Fil: Wirth, Sonia Alejandra. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.