Eventos celulares durante la fecundación en humanos

• Autores: Rawe, Vanesa Y.
• Año de publicación: 2000
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Vitullo, Alfredo D.
• Materia: FECUNDACION IN VITRO; FALLA DE FECUNDACION; FECUNDACION ANORMAL; INYECCION INTRACITOPLASMICA DE ESPERMATOZOIDES; INMUNOFLUORESCENCIA; IN VITRO FEERTILIZATION; INTRACYTOPLASMIC SPERM INJECTION; ABNORMAL FERTILIZATION; FERTILIZATION FAILURE; IMMUNOFLUORESCENCE
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Para dilucidar distintos aspectos del proceso de fecundación y desarrollo temprano, en lapresente tesis se analizaron oocitos humanos ‘no fecundados' y ‘fecundados anormalmente'luego de Fecundación In Vitro (FIV) e Inyección Intracitoplásmica de Espermatozoides (ICSI),haciendo hincapié en la arquitectura del citoesqueleto, estado de la cromatina, organizacióndel áster y presencia de activaciones abortivas. Se estudiaron un total de 815 oocitos clasificados como ‘no fecundados’ y 153 oocitosclasificados como ‘fecundados anormalmente' luego FIV e ICSI. El material se procesó parainmunofluorescencia mediante la utilización de anticuerpos monoclonales para la detección de B tubulinas y a tubulinas acetiladas. El material genético se estudió con Hoechst 33258 y seanalizó por microscopía óptica (UV). El análisis citogenético se realizó en 189 oocitosactivados luego de FIV e ICSI según la técnica de Tarkowski (1966). Durante las fallas de fecundación, la principal causa luego de FIV, fue la ausencia depenetración espermática (59,2%), el 10,5% mostró una falla de activación oocitaria y el 15,2% presentó alteraciones en la nucleación o migración de pronúcleos. Luego de ICSI, laprincipal causa de falla de fecundación fue la alteración de la activación oocitaria (36,5%). Un 18,5% de los oocitos detuvieron su desarrollo en la primera placa metafásica. El estudio cromosómico, permitió identificar la presencia de activaciones abortivas; metafases III (MIII), núcleos reticulares (NR) y núcleos telofásicos (NT). En la fecundación anormal, el patrón más frecuentemente detectado luego de FIV fue lapresencia de 3 ó 4 pronúcleos (PNs), (77,4%). Por el contrario, luego de ICSI resultó ser lapresencia de 1PN (65,2%). Se observaron leves diferencias en el desarrollo de subnúcleosentre ambos grupos.
In order to dilucidate different aspects during fertilzation and early development, we analyzed “non-fertilized" and “abnormally fertilized" human oocytes after In Vitro Fertilization (IVF) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). We focused on the cytoskeletal architecture,chromatin configuration, aster organization and the presence of abortive activations. We analyzed 815 “non-fertilized"and 153 “abnormally fertilized" oocytes after IVF and ICSI. The material was processed for immunofluorescence to detect B tubulins and a acetylatedtubulins. DNA was studied using Hoescht. Chromosomal spreads were performed by Tarkowski's air-drying method in 189 IVFand ICSI oocytes. During fertilization failure, the main reason after IVF was no sperm penetration (59.2%). Theremaining oocytes showed different abnormal patterns: oocyte activation failure (10.5%) anddefects in pronuclei apposition (15.2%). On the other hand, fertilization failure after ICSI wasmainly associated to incomplete oocyte activation (36.5%). An 18.5% of the studied oocytesstopped their development at the metaphase of the first mitosis of the pre-embryo. The Chromosomal spreads allowed identifying abortive activations, including metaphase III andothers. Immunofluorescence analysis of abnormal fertilization showed that the most frequentabnormal fertilization pattern found after IVF was the presence of 3 or 4 PNs (77.4%). Onthe other hand, the presence of 1 PN (65.2%) was the main pattern found after ICSI. Nodifferences between both groups were seen in terms of subnuclei development.
Fil: Rawe, Vanesa Y.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.