Supresión de la megacariocitopoyesis mediada por óxido nítrico

• Autores: Pozner, Roberto Gabriel
• Año de publicación: 2005
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Schattner, Mirta Ana
• Materia: MEGACARIOCITOS; APOPTOSIS; OXIDO NITRICO; CASPASAS; BCL-XL; MEGAKARYOCYTES; APOPTOSIS; NITRIC OXIDE; CASPASES; BCL-XL
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En el presente trabajo se analizó el efecto del óxido nítrico (ON) sobre la proliferación de megacariocitos (MCs). Células mononucleares (CMN) o CD34+ fueron cultivadas en medio líquido en presencia de nitroprusiato de sodio (NPS), 2,2′-(Hidroxinitrosohidracino)bis-etanamina (DETA/ON) o 1-propil-1'-(3- aminopropil)-2-hidroxi-2-nitrosohidrazina (PAPA/ON) y luego estimuladas con trombopoyetina. El número del MCs disminuyó por el tratamiento con los dadores de ON. La estimulación de CMN o células CD34+ con factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) o interferón-γ (IFN-γ) incrementó los niveles endógenos de ON y suprimió el crecimiento de MCs. Además, el tratamiento con inhibidores de la síntesis de ON revirtió parcialmente la inhibición del crecimiento de MCs inducida por TNF-α e IFN-γ aunque el incremento de los niveles de ON fue completamente suprimido. El análisis del contenido de ADN por citometría de flujo demostró que la apoptosis es el mecanismo asociado con el efecto citotóxico del ON. El tratamiento de MCs con ON promovió un aumento en los niveles de GMPc y establecimos el rol central de este segundo mensajero durante la apoptosis de MCs mediante diversas estrategias farmacológicas para modular sus niveles intracelulares. Además, los MCs tratados con PAPA/ON mostraron un aumento tanto en la expresión del fragmento activo de caspasa-3 como de su actividad biológica y paradójicamente aumentó la expresión de Bcl-xL. Por otra parte, el ON no fue capaz de modular la formación de proplaquetas ni la producción de plaquetas en cultivo pero si de inhibir la adhesión de MCs a células endoteliales. Estos hallazgos en conjunto señalan al ON como un regulador negativo de la megacariocitopoyesis.
In the present work it was analyzed the effect of nitric oxide (NO) on megakaryocyte (Mk) proliferation. Mononuclear (MNCs) and CD34+ cells were cultured in liquid medium in the presence of sodium nitroprusside (SNP), 2,2′- (Hydroxynitrosohydrazino)bis-ethanamine (DETA/NO) or 1-propyl-1'-(3- aminopropyl)-2-hydroxy-2-nitrosohydrazine (PAPA/NO) and then stimulated with thrombopoietin. Mk number decreased after treatment with all NO donors. Stimulation of MNCs or CD34+ cells with tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interferon-γ (IFN-γ) increased endogenous NO levels and suppressed Mk growth. Besides, treatment with NO synthesis inhibitors partially reversed Mk growth inhibition induced by TNF-α and IFN-γ, although increased NO levels returned to normal values. DNA analysis by flow cytometry showed that apoptosis is the mechanism associated with the cytotoxic NO effect. Mk treatment with PAPA/ON promoted an increase in the cGMP intracellular levels and it was established the leading role of this second messenger in Mk apoptosis by using several pharmacological strategies to modulate its levels. Besides, Mk treatment with PAPA/NO caused an increase not only in the caspase-3 active fragment expression but also in its activity and, paradoxically enhanced the expression of Bcl-xL. On the other hand, NO failed to modulate neither proplatelet formation nor platelet production in culture but it inhibited MC adhesion to endothelial cells. Taken together, these findings point NO as a negative regulator of megakaryopoiesis.
Fil: Pozner, Roberto Gabriel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.