Perfil de activación de macrofagos de ratones nod : efecto de la preñez y modulación por el péptido intestinal vasoactivo (VIP)

• Autores: Larocca, Luciana
• Año de publicación: 2010
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Pérez Leirós, Claudia
• Materia: NOD; MACROFAGOS; AUTOINMUNIDAD; VIP; PREÑEZ; NOD; MACROPHAGES; AUTOIMMUNITY; VIP; PREGNANCY
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Una de las consecuencias de una mala resolución de la inflamación aguda es el establecimiento de un proceso inflamatorio crónico con diversos eventos asociados como, por ejemplo, alteración de la homeostasis, falla funcional y la posibilidad de inducción de pérdida de la tolerancia inmunológica. El síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune que se caracteriza por una severa disfunción secretoria salival y lagrimal conocida como sintomatología sicca. Como la mayoría de las enfermedades reumáticas afecta en mayor medida a mujeres. Los ratones diabéticos no obesos (NOD) ofrecen un modelo interesante para estudiar procesos de mantenimiento y ruptura de la homeostasis tisular que conducen a pérdida de tolerancia y autoinmunidad. En este modelo a partir de las 12 semanas, en el estado prediabético desarrollan una sialadenitis espontánea a predominio Th1 con pérdida de la función secretoria, semejante en algunos aspectos a la enfermedad en humanos. Por otro lado, en el modelo NOD prediabético observamos una disminución de la tasa de natalidad a partir de la tercera preñez y en esos casos hemos observado procesos re reabsorción embrionaria a los 10 días de gestación. Los macrófagos son células del sistema inmune que están altamente especializadas y cumplen un papel destacado en la inmunidad anti-infecciosa ya que tienen alta capacidad fagocítica, microbiostática y microbicida. El VIP por su naturaleza como factor anti-inflamatorio que se lo ha propuesto como agente terapéutico para patologías autoinmunes, como la artritis reumatoide (AR) y la enfermedad de Crohn. En la primera y segunda parte de este trabajo quisimos ver como respondían los macrófagos NOD frente a LPS y presentamos evidencias que producen mayores niveles de mediadores pro-inflamatorios y menor cantidad de IL-10; VIP, por su parte, modula la respuesta inflamatoria actuando a través de al producción de IL-10 y metabolitos de COX, como por ejemplo la PGE2, que limitan la producción de nitritos. Asimismo los macrófagos NOD presentan una translocación basal de la subunidad p65 de NF-kB y VIP inhibe la translocación. La preñez normaliza todos los factores antes mencionados. En una tercera y cuarta parte quisimos determinar cómo respondían los macrófagos NOD frente a timocitos apoptóticos y como se modifica durante la preñez y observamos que producen mayores niveles de mediadores pro-inflamatorios y menor cantidad de IL-10, también observamos translocación basal en la subunidad p65; de NF-kB y el VIP prodría modular la respuesta inflamatoria como pasaba frente a LPS. Mientras que durante la preñez no se observa translocación a nivel basal de p65 y los macrófagos producen menores niveles de nitritos en presencia del estimulo apoptótico y se induce la producción de IL-10 por este estímulo, no requiriendo del VIP. Finalmente, en la quinta parte estudiamos cómo se comportan los macrófagos NOD frente a células acinares y pudimos ver que en presencia de ese estimulo tanto los nitriros como IL-10 se comportan a lo observado frente a LPS.
The establishment of a chronic inflammatory process is one of the various consequences of an impaired resolution of the acute inflammatory response. It involves several associated events such as homeostatic imbalance, functional failure and immunotolerance loss.Sjögren's syndrome (SS) is an autoimmune disease characterized by a severe secretory dysfunction known as sicca syndrome and, as most autoimmune diseases, it affects women with higher incidence. Non obese diabetic (NOD) mice offer an interesting model to study tissue homeostasis maintenance or disruption that might lead to tolerance loss and autoimmunity. At 12 weeks of age in the prediabetic stage mice develop a Th1 prodominant spontaneous sialoadenitis resembling SS. On the other hand, a reduced birthrate was observed in prediabetic NOD females that were 16 weeks of age at the time of mating with an increased resorption rate as determined at 10 days of gestation. Macrophages are immune cells highly specialized and with a major role in anti-infectious immunity due to their high phagocytic and anti-microbial activity. Vasoactive intestinal Peptide (VIP) has strong anti-inflammatory effects and it has been proposed as a therapeutic agent for autoimmune pathologies as Rheumatic Arthiritis and Crohn Disease. In the first and second parts of this work we analyzed the macrophage response upon LPS stimulus and we present evidence of their higher levels of pro-inflammatory mediators and lower of IL-10; and that VIP modulates the inflammatory response through the production of IL-10 and COX metabolites as PGE2 thus limiting nitrites production. Likewise, NOD macrophages present a basal translocation of p65 subunit of NF-kB and VIP inhibits this effect. Pregnancy, in turn, normalizes these parameters. The third part of this Thesis shows the response of macrophages upon a phagocytic stimulus as that of apoptotic thymocytes and how this may change during pregnancy. We observed that they produce higher levels of proinflammatory mediators and lower levels of IL-10; we have also seen p65 basal translocation to the nucleus in these cells. VIP could also modulate the inflammatory response as observed in LPS stimulated macrophages. Macrophages isolated from pregnant NOD mice do not show basal translocation of p65, they do not produce nitrites when faced with a phagocytic stimulus and they secrete IL-10 even in the absence of VIP. Finally, we determined the response of macrophages co-cultured with acinar cells and we found that acini induce a similar inflammatory response to the observed with LPS.
Fil: Larocca, Luciana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.