Biosíntesis de porfirinas en Trypanosoma cruzi

• Autores: Zallocchi, Marisa Laura
• Año de publicación: 1998
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de grado
• Colaborador/a o director/a de tesis: Lombardo, María Elisa; Araujo, Lidia Susana
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El Trypanosoma cruzi es un protozoario flagelado que necesita se le suministren compuestos hérnicos como factores de crecimiento para su reproducción in vitro. Estos requerimientos nutricionales están asociados con su incapacidad para biosintetizar hemo. En estos hemoflagelados se ha encontrado que la hemina puede ser sustituida por Protoporfirina IX, último intermediario en la ruta biosintética del hemo, evidenciando la presencia de una ferroquelatasa activa. Por otro lado, ni el ALA ni el PBG, precursores de todas las porfirinas, pueden sustituir a este factor de crecimiento, sugiriendo la pérdida de actividad de una o más enzimas intermediarias. Estudios anteriores realizados sobre las distintas enzimas involucradas en la síntesis de hemo mostraron que 1) Existen niveles variables y bajos de ALA y PBG que dependen del medio de cultivo empleado para el crecimiento del parásito; 2) Existe una alta actividad de Succinil-CoA Sintetasa, enzima que provee uno de los sustratos para la formación de ALA; 3) Existe una actividad muy baja de ALA-S y DOVA-T, las dos enzimas que pueden sintetizar ALA; 4) Existe una baja actividad de ALA-O; 5) No se detecta actividad de PBGasa y Deaminasa y 6) Existe una ferroquelatasa funcional. En consecuencia, a partir de estos resultados, se podría sugerir que el Trypanosoma cruzi sólo conserva funcional una o las dos enzimas que sintetizan ALA (ALA-S y DOVA-T) y a la Ferroquelatasa (siendo todas estas enzimas mitocondriales). Este trabajo tuvo como objetivo dilucidar la o las enzimas, pertenecientes a la ruta metabólica del hemo, que se encuentran en baja cantidad o ausentes, en T. cruzi. Los primeros ensayos fueron realizados con el fin de dilucidar si el parásito acumula precursores y/o metabolitos intermedios, para poder establecer la existencia de un posible bloqueo en esta ruta biosintética. Se encontró que si bien el parásito no acumula precursores ni porfirinas en forma intracelular, excreta al medio de cultivo gran cantidad de ALA y PBG. Cuando se midieron las actividades enzimáticas se encontró sólo actividad de SuccinilCoA Sintetasa y de DOVA-T. Esta última enzima, mostró mayor afinidad por el glutamato, como dador de grupos aminos, que por la alanina, el otro aminoácido testeado. En cuanto al DOVA, su otro sustrato, se obtuvo una muy baja afinidad, por lo que se supone que la enzima puede estar inhibida o que la reacción de sintesis de ALA se esté llevando a cabo por alguna transaminasa inespecífica. En el extracto libre de células de T.cruzi, se detectó la presencia de un inhibidor de la actividad ALA-S de otras fuentes enzimáticas (Rhodobacter spheroides). El inhibidor es un compuesto inestable al calor, de bajo peso molecular (distinto del ALA o el hemo), no relacionado con el mecanismo de regulación cistationasa-rodenasa y que se encuentra presente inicialmente en el homogenato. La inhibición se detectó en presencia de concentraciones saturantes de los sustratos, por lo que se descarta que se trate de una inhibición de tipo competitiva.
Fil: Zallocchi, Marisa Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.