Rol del coactivador de receptores nucleares Rac3 en la sensibilidad a la apoptosis

• Autores: Coló, Georgina Pamela
• Año de publicación: 2007
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Costas, Mónica Alejandra
• Materia: APOPTOSIS; NF-KB; COACTIVADORES DE RECEPTORES NUCLEARES; APOPTOSIS; NF-KB; NUCLEAR RECEPTOR COACTIVATORS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Los coactivadores de receptores esteroideos (SRC), cumplen un rol importante en varios procesos biológicos. En células normales estas moléculas están presentes en cantidades limitantes, siendo casi indetectables, sin embargo, en ciertos tumores se encuentran sobre-expresadas. RAC3 pertenece a la familia de coactivadores p160 y hemos demostrado previamente que es coactivador de NF-κB, un factor de transcripción que induce numerosas respuestas biológicas relacionadas con la proliferación, diferenciación celular, y protección de apoptosis entre otras. En este trabajo se estudió el rol de RAC3 en la sensibilidad a la apoptosis, inducida tanto por vía intrínseca como la vía extrínseca. En la línea celular de riñón embrionario humano (HEK293) estudiamos la vía mitocondrial inducida por H2O2 y en células de leucemia mieloide crónica humana (K562), la vía extrínseca asociada a receptores con dominios de muerte inducida por una citoquina perteneciente a la familia de TNF: TRAIL. Esta línea fue descripta como naturalmente resistente al tratamiento con TRAIL. Observamos que la línea tumoral K562 posee niveles altos de RAC3 respecto de la línea HEK293. La sobre-expresión natural o por transfección del coactivador inhibe la apoptosis vía una disminución de la activación de caspasas, aumento de la actividad NF-κB, AKT, p38 y disminución de ERK. Lo opuesto fue observado por disminución de RAC3 mediante RNAi en K562, sensibilizando a la apoptosis por TRAIL. Observamos además, que la sobre-expresión de RAC3 inhibe la translocación de AIF al núcleo a través de mecanismos que involucran una interacción física entre RAC3, AIF, Hsp90 y proteínas del citoesqueleto. Estas observaciones sugieren que RAC3, además de actuar como coactivador a nivel transcripcional tendría un rol citoplasmático, participando en las cascadas que controlan la muerte celular y contribuyendo de este modo al desarrollo tumoral.
The steroid receptor coactivators (SRC) play important roles in many biological processes. These molecules are present in limiting quantities in normal cells, but they were found over-expressed in several tumors. RAC3 is a member of p160 coactivator family and we have previously demonstrated that RAC3 is a NF-κB coactivator. This transcription factor induces many biologic responses related to cell proliferation, differentiation, anti-apoptotic and others. In this work we analyzed the role of RAC3 in the sensitivity to apoptosis, induced by both the intrinsic and the extrinsic pathway. We studied the mitochondrial pathway induced by H2O2 in human embryonic kidney (HEK293) line and the extrinsic cascade associated to the death receptor induced by TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) in the human chronic myelocytic leukemia cell line (K562). It has been previously demonstrated that K562 cells are naturally resistant to TRAIL-induced apoptosis. In this work, we observed that K562 cells have higher levels of RAC3 than HEK293 cell line. The natural or transfected coactivator over-expresion inhibits apoptosis through a molecular mechanism that involves the reduction of caspase activation, the increase on the activity of NF-κB, AKT and p38 and decrease on ERK activity. In addition, we also found that K562 cells become sensitive to TRAIL induced apoptosis after inhibition of RAC3 levels through siRNA transfection. Moreover, the RAC3 over-expression inhibits the AIF nuclear translocation through a physical interaction between RAC3, AIF, Hsp90 and cytoskeleton proteins. Taken together all these results suggest that RAC3 contributes to tumor development exerting an anti-apoptotic role through cytoplasmatic actions in addition to its classical genomic effects as nuclear receptor coactivator.
Fil: Coló, Georgina Pamela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.