Estudio de la serina hidroximetiltransferasa de tripanosomátidos (Crithidia Fasciculata y Trypanosoma cruzi) : purificación y propiedades cinéticas y físico-químicas

• Autores: Capelluto, Daniel G. S.
• Año de publicación: 1997
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Cannata, Joaquín Juan Bautista; Cazzulo, Juan José
• Materia: SERINA HIDROXIMETILTRANSFERASA; CRITHIDIA FASCICULATA; TRYPANOSOMA CRUZI; PURIFICACION; INHIBIDOR; SERINE HYDROXYMETHYLTRANSFERASE; CRITHIDIA FASCICULATA; TRYPANOSOMA CRUZI; PURIFICATION; INHIBITOR
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La serina hidroximetiltransferasa (SHMT) cataliza la interconversión deserina y glicina transfiriendo una unidad carbonada al tetrahidrofolato requeridapara la síntesis de purinas, timidilato, metionina y colina. La mayor parte de las SHMTs estudiadas son dependientes de piridoxal-5'-fosfato(PLP). La SHMT eneucariontes existe como isoformas mitocondrial y citosólica, codificadas porgenes diferentes. También ha sido demostrada una tercera SHMT, presente encloroplastos. El presente trabajo es el primero que informa la purificación ycaracterización de una SHMT a partir de tripanosomátidos y en particular, sedemuestra la presencia de tres formas moleculares de la enzima (las cuales sedesignaron SHMT I, II y III) en Crithidia fasciculata. Las isoformas fueronpurificadas a homogeneidad de acuerdo al análisis por SDS-PAGE. Los pesosmoleculares nativos de las SHMTs I, II y III, calculados por el método de Andrews, dieron valores de 226, 173 y 211 kDa, respectivamente. Los pesosmoleculares de sus subunidades fueron: 53,8, 50,7 y 51,7 kDa respectivamente,sugiriendo una estructura homotetramérica de las proteínas, coincidente con las SHMTs de hongos, plantas y mamíferos. Las tres isoformas fuerondependientes de PLP, aunque presentaron diferentes comportamientoscinéticos. También fue parcialmente purificada y caracterizada la SHMT de Trypanosoma cruzi. Se ha detectado una sola forma de la enzima en esteparásito, utilizando la misma metodología. La SHMT, de 69 kDa, fue altamenteinestable, aunque presentó,en algunos casos, similares propiedades a lasestudiadas en C.fasciculata. Por otra parte, fue parcialmente purificado ycaracterizado un inhibidor endógeno de la SHMT a partir de T.cruzi, similar alaislado de semillas de Vigna radiata.
Serine hydroxymethyltransferase (SHMT) catalyzes theinterconversion of serine and glycine, with tetrahydrofolate serving as the C1acceptor, the latter is required for the biosynthesis of purines, thymidylate,methionine and choline. Most SHMTs studied require pyridoxal-5'-phosphate (PLP) as a cofactor. SHMT exists as both cytosolic and mitochondrialisoforms encoded by separate genes. A third isoform has been shown inchloroplasts from plants. The present work reports on the first isolation andcharacterization of SHMT from Trypanosomatids, and particularly theevidence for the presence of three isoforms of the enzyme (SHMTs I, II and III) in Crithidia fasciculata, which were purified to homogenity according to SDS-PAGE analysis. The native molecular weight of SHMTs I, II and III,calculated by Andrews’ method, gave values of 226, 173 and 211 kDarespectively. The subunit molecular weights of them were 53.8, 50.7 y 51.7respectively, suggesting a homotetrameric structure, similar to those ofyeast, fungi, plants and mammalian SHMTs. All molecular forms weredependent on PLP, but they exhibited different kinetic behaviour. We havealso partially purified and characterized the SHMT from Trypanosoma cruzi;we have been able to detect only one molecular form from this source usingthe same method. The 69 kDa SHMT was very unstable, but it had similarproperties to those of C.fasciculata. A naturally occurring inhibitor of SHMT in T.cruzi was also partially purified and characterized, and it was similar to thatreported in Vigna radiata seedlings.
Fil: Capelluto, Daniel G. S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.