Desarrollo del sistema visual : estimulación y seguimiento clonal de las células madre/progenitoras de la retina

• Autores: Olmos Carreño, Cindy Lorena
• Año de publicación: 2020
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Scicolone, Gabriel E.; López Mascaraque, Laura
• Materia: CELULAS MADRE/PROGENITORAS; ZONA MARGINAL CILIAR DE LA RETINA; FACTORES TROFICOS; CELULAS GANGLIONARES DE LA RETINA; UbC-Star-Track; ANALISIS CLONAL; STEM/PROGENITOR CELLS; RETINAL CILIARY MARGINAL ZONE; TROPHIC FACTORS; RETINAL GANGLION CELLS; CLONAL ANALYSIS; UbC-Star-Track
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La retina del embrión de pollo es un sector accesible del sistema nervioso central, de fácil manipulación desde etapas tempranas del desarrollo. Ésta posee un nicho de células madre/progenitoras, ubicado en un anillo periférico llamado zona marginal ciliar (ZMC). Estos precursores originan todos los tipos celulares de la retina, pero progresivamente pierden esta potencialidad. Los objetivos de este proyecto fueron:1) Analizar in ovo el potencial ontogénico de las células madre/progenitoras de la retina(CPR)y la distribución espacio-temporal de su progenie. Para esto implementamos la metodología UbC-StarTrack.2) Determinar si la modificación de las condiciones microambientales in vitro-concentraciones de insulina y factor de crecimiento fibroblástico 2 (FGF-2)-permitencambiar el potencial de diferenciación de las células madre/progenitoras de la ZMC, a fin de obtener un alto grado de diferenciación hacia células ganglionares de la retina (CGR) en E12,etapa de desarrollo en la cual éstas ya no se diferencian.UbC-StarTrackes un método de análisis clonal que genera marcas específicas,rastreables y heredadaspor todas las células que componen un linaje surgido de una célula única. Esto permitió realizar un seguimiento espacio-temporal de los distintos tipos celulares que se originan de células madre/progenitoras de la ZMC y definir su potencialidad, demostrando que en el desarrollo temprano, dicha región alberga células multipotentes y unipotentes. También,establecimos in vitrolas concentraciones de insulina y FGF-2que favorecen la obtención de CGR a partir de células de la ZMC de embriones de E12. Y demostramos que las condiciones in vitrocitadas son suficientes para modificar el potencial de desarrollo de algunos grupos de células madre/progenitoras provenientes de la ZMC.Los hallazgos obtenidos tienen una importancia significativa en el diseño de protocolos de diferenciación hacia linajes celulares específicos con fines terapéuticos.
The chick embryo retina is an accessible areaofthe central nervous system (CNS), which is also easy to handle since early stages of development. It has a niche of stem/progenitor cells, located in a peripheral ring called the ciliary marginal zone (CMZ). These precursors give rise to all cell types of the retina, but progressively theylose this potential.The objectives of this project were: 1) To analyze in ovo the ontogenic potential of retinalstem/progenitor cells and the spatio-temporal distribution of their cellular progenies. To address this objective we implemented the UbC-StarTrack methodology.2) To determine whether the modification of in vitromicroenvironmental conditions -concentrations of insulin and fibroblast growth factor 2 (FGF-2)-allow to change the differentiation potential of the stem/progenitorcells of the CMZ, in order to obtain a high numberof differentiated RGC from stem/progenitor cellsat E12, a developmental stage in which the RGC are no longer generated.UbC-StarTrack is a method of clonal analysisthat leads to the generation of specific and traceable marks, which areinherited by all the cells originatedfrom a singleprogenitorcell. This allowed us to track the different cell types originated from a specific stem/progenitor celland to define the ontogenic potential of stem/progenitor cells of the CMZ, demonstrating that at early stages of development, thisregion harbors multipotent and monopotent progenitor cells. Besides, we established the in vitroconcentrations of insulin and FGF-2 that favor the differentiation to RGC from stem/progenitor cells originated in the CMZ of E12 chick embryos. We demonstrated that the aforementioned in vitroconditions are sufficient to modify the developmentalpotential of some groups of stem/progenitorscells obtained from the CMZ. These data are of significant importance in order to manipulate stem/progenitor cells to design regeneration strategies in the CNS.
Fil: Olmos Carreño, Cindy Lorena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.