Transporte iónico en una línea celular derivada de trofoblasto humano (BeWo) y en placenta humana

• Autores: Marino, Gabriela Inés
• Año de publicación: 2012
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Kotsias, Basilio Aristides; Assef, Yanina Andrea
• Materia: PLACENTA HUMANA; CELULAS BEWO; ACTIVIDAD IONICA; PATCH CLAMP; ORCC; ENAC; CFTR; MIGRACION CELULAR; PROLIFERACION CELULAR; HUMAN PLACENTA; BEWO CELLS; PATCH CLAMP; IONIC ACTIVITY; ENAC; CFTR; ORCC; CEL MIGRATION; CELL PROLIFERATION
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Estudiamos los canales aniónicos ORCC y CFTR y el canal de sodio ENaC en la línea BeWo derivada de trofoblasto humano. La actividad iónica fue estudiada con la técnica de patch clamp en las configuraciones de canal único (inside out y cellattached) y célula entera (whole cell). La expresión de las proteínas fue analizada con técnicas corrientes de biología molecular. Los tres objetivos fueron: 1) identificar y caracterizar la actividad de esos canales con la ayuda de agentes farmacológicos, 2) estudiar la expresión de las proteínas de los canales clonados; 3) analizar la participación de esos canales en la proliferación, y la migración celular por medio del modelo de cierre de la herida. Los principales resultados fueron: Las células BeWo tienen canales aniónicos y catiónicos funcionales que se expresan en la membrana. Las corrientes de Na+ por el canal ENaC sensible al amiloride y las corrientes transportadas por el ORCC y CFTR participan en la migración o proliferación celular. La aldosterona que estimula la metilación de ENaC juega un papel importante en el mecanismo por el cual el ENaC participa en la migración celular. En conclusión, fuimos capaces de aislar y caracterizar canales aniónicos y catiónicos en las células BeWo y establecer su papel en la migración y proliferación celular.
Anion channels such as ORCC and CFTR and the sodium channel ENaC were studied in the human trophoblastic cell line BeWo. Ion channel activity was recorded in the cell attached and inside out and in the whole cell configurations with patch-clamp technology and the expression of the proteins were studied with current techniques of molecular biology. Three main objectives were planned: 1) to identify and characterize the activity of these channels with pharmacological tools; 2) to study the expression of the cloned channels in the cell membranes; 3) to analyze the participation of these channels in the cellular processes and migration with the aid of a wound healing model. The main results were: BeWo cells have functional anionic and cationic channels and they are expressed in the membranes. Na+ currents mediated by the amiloride sensitive ENaC and currents transported by CFTR and ORCC are involved in either cell migration or cell proliferation. Aldosterone which stimulates protein methylation of ENaC seems to play an important role in the mechanism of action of ENaC in the migration process. In conclusion we were able to identify clearly anionic and cationic channels in BeWo cells and to establish their participation in the migration and proliferation processes.
Fil: Marino, Gabriela Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.