Relación entre el canal CFTR y proteínas Shroom en ovocitos de Xenopus laevis

• Autores: Palma, Alejandra Graciela
• Año de publicación: 2017
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Kotsias, Basilio Aristides; Marino, Gabriela Inés
• Materia: CFTR; SHROOM; ENAC; ACTIVIDAD IONICA; VOLTAGE CLAMP; OVOCITOS; CFTR; SHROOM; ENAC; IONIC ACTIVITY; VOLTAGE CLAMP; OOCYTES
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Estudiamos el canal iónico CFTR y el canal de sodio ENaC en ovocitos de Xenopuslaevis. Las corrientes iónicas se estudiaron con la técnica de voltage clamp y la expresiónde las proteínas analizada con técnicas corrientes de biología molecular. Los cuatroobjetivos fueron: 1) evaluar la expresión y funcionalidad heteróloga del canal de cloruro CFTR, 2) analizar el efecto de la inhibición de xShroom1 sobre el canal CFTR, 3) investigarlos mecanismos por los cuales xShroom1 se relaciona con CFTR, 4) estudiar la relaciónentre CFTR, ENaC y xShroom1. Los principales resultados fueron: El canal CFTR seexpresa y es funcional en los ovocitos de Xenopus laevis inyectados con su ARNc. Lasupresión de la proteína xShroom1 resultó en un incremento marcado en las corrientes de CFTR al promover un aumento en la vida media del canal en la membrana plasmática. Estosería debido a una reducción en la vía degradativa, aunque no descartamos un cambio enla probabilidad de apertura de CFTR. Tanto el CFTR como la supresión de xShroom1produjeron una reducción en las corrientes de sodio sensibles al amiloride. La inhibición de ENaC por CFTR es mayor cuando xShroom1 es suprimido, debido al aumento en lacorriente de CFTR. En conclusión, logramos conocer la relación y mecanismos involucradosdel CFTR con la proteína Shroom en ovocitos de Xenopus laevis.
Ionic channel CFTR and the sodium channel ENaC were studied in Xenopus laevisoocytes. Ion channel activity was recorded with voltage clamp technology and theexpression of the proteins was studied with current techniques of molecular biology. Fourmain objectives were planned: 1) to evaluate the expression and heterologous functionalityof the chloride channel CFTR; 2) to analize the effect of xShroom1 downregulation on CFTRchannel; 3) to investigate the mechanisms by wich xShroom1 is related to CFTR; 4) to studythe relationship between CFTR, ENaC and xShroom1. The main results were: CFTRchannel is expressed and functional in Xenopus laevis oocytes injected with CFTR cRNA.xShroom1 suppression results in the increment of CFTR currents by promoting the increaseof the half-life of CFTR in the plasma membrane. This would be due to a reduction in thedegradative pathway, although we do not discard a change in the openings of the CFTRchannels. CFTR and the xShroom1 downregulation decrease amiloride sensitive sodiumcurrents. ENaC inhibition by CFTR is higher when xShroom1 is suppressed, due to anincrease in CFTR current. In conclusion we were able to know the relationship and themechanisms between CFTR and Shroom protein in Xenopus laevis oocytes.
Fil: Palma, Alejandra Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.